胰腺癌组织中诱导型一氧化氮合成酶和肿瘤相关巨噬细胞的表达与淋巴结转移的关系

摘要

胰腺癌为临床较常见的恶性肿瘤，早期难以发现，晚期常有周围组织、血管神经的浸润和淋巴结转移。在肿瘤细胞的恶性增殖和转移过程中，iNOS被认为是最重要的因子之一。现已有研究表明，iNOS具有通过多种途径促进肿瘤生长、发展和转移的作用。NO作为肿瘤细胞信号转导途径中重要的信使分子，调节与细胞增殖相关基因的表达，增加肿瘤血供的血管生成，促进肿瘤生长、侵袭和转移。VEGF是参与血管生成过程的血管生成因子中，唯一能特异性地作用于血管内皮细胞的有丝分裂原，在肿瘤血管生成的各个环节中起着重要作用。VEGF对内皮细胞移行、增殖和管腔形成的作用部分是通过其诱导的信号转导分子NO来完成。研究发现VEGF与NO之间存在密切的关系。肿瘤的NO可上调VEGFmRNA水平，VEGF水平与肿瘤血管化程度正相关。因此，NO及其合酶可能是VEGF调节血管生成的下游通道和介质。 近期有研究发现肿瘤相关巨噬细胞(tumour-associated macrophages，TAMs)也与淋巴结转移有密切关系。许多肿瘤组织特别是上皮组织包括肺、乳腺、胃的实体瘤内有大量的TAMs存在。TAMs主要来源于外周血单核细胞，也有一部分是固定的组织巨噬细胞。浸润的部位主要位于肿瘤的基质部和血管内皮。巨噬细胞有抗肿瘤作用，可肿瘤组织尽管有大量TAMs的浸润，却能继续生长，说明TAMs可能具有促进肿瘤生长的作用。 TAMs对肿瘤组织的作用机制目前尚不完全清楚。免疫组织化学染色及微血管计数发现某些肿瘤的TAMs与血管形成有关。有研究表明食道癌中TAMs的数量和iNOS的表达有关，同时证实iNOS并和瘤周的淋巴管密度及淋巴结转移有关。 但在胰腺癌中TAMs和iNOS与淋巴结转移的关系尚无报告。本实验用免疫组化方法对比进行了研究。 材料与方法： 收集1999～2005年中国医科大学附属一院手术切除胰腺癌标本35例，其中男24例，女11例，年龄34～76岁，平均54.2岁。患者术前均未经任何治疗。所有标本均经病理证实。高分化腺癌19例，中分化腺癌9例，低分化腺癌7例。临床TNM分期：Ⅰ期8例，Ⅱ期12例，Ⅲ期10例，Ⅳ期5例。有淋巴结转移15例，无淋巴结转移20例。收集了因胆管下段癌行胰十二指肠切除术而切除的正常胰腺组织6例，其中男4例，女2例，年龄39～75岁，平均58.4岁。以上标本均经过脱水，福尔马林固定，石蜡包埋，连续切片(厚度4μm)。抗原修复后，常规SP法正常胰腺和胰腺癌组织免疫组化染色。鼠抗人CD68单克隆抗体标记巨噬细胞，鼠抗人iNOS单克隆抗体标记iNOS。设阳性及阴性对照，并进行常规HE染色。以光镜下随机3个癌组织高倍视野(400倍)内TAMs细胞数的均值为该病例TAMs值。iNOS的表达以其评分值表示：以癌组织染色强度评分(无，0分；弱，1分；中，2分；强，3分)和阳性细胞率评分(小于5％，0分；5～10％，1分；10～20％，2分；20～50％，3分；大于50％，4分)之和为该病例评分值，将评分值小于或等于2分定为阴性病例，大于2分定为阳性病例。 用SPSS 12.0统计软件进行统计学分析，计量资料用(x±s)表示。两组之间比较采用t(t’)检验，三组或三组以上两两比较采用方差分析(Newman-keuls法，q检验)。采用Pearson相关系数检验VEGF评分与TAMs计数之间的关系，P<0.05有统计学意义。 结果: 1．免疫组织化学染色结果正常组中巨噬细胞分布明显稀少，胰腺癌组中CD68表达呈黄色或棕黄色颗粒状，主要位于巨噬细胞的胞膜和胞浆。在癌组织及癌周组织广泛分布。iNOS的表达也呈黄色或棕黄色颗粒，主要位于癌细胞的胞浆中，在癌细胞中表达比较明显，在癌周围及正常组织中较少表达。 2．iNOS的表达与各项临床指标的关系 iNOS在胰腺癌组中的表达阳性率为54％(19/35)评分值3.17±1.22，明显高于正常组(P<0.01)。在胰腺癌各病理分级组和临床分期组之间的差别无统计学意义(P>0.05)。淋巴结转移组的iNOS表达高于淋巴结未转移组，差别有统计学意义(P<0.05)。 3．TAMs计数与各项临床指标的关系胰腺癌中TAMs计数均值为112.27±24.57。在胰腺癌各病理分级组和临床分期组之间的差别均有统计学意义(P<0.05)。淋巴结转移组中TAMs计数高于淋巴结未转移组，其差别有统计学意义(P<0.05)。 4．胰腺癌中iNOS的表达与TAMs计数之间的关系在胰腺癌中iNOS的表达和巨噬细胞计数呈直线正相关关系(γ=0.551，P<0.05)。即随肿瘤组织内巨噬细胞计数的增加，iNOS的表达也随之增加。 讨论: 胰腺癌是较为常见的恶性肿瘤。而血管新生是恶性肿瘤生长和转移的前提。iNOS是作用较强的促血管生长因子之一。本研究显示iNOS主要表达于胰腺癌组织中，癌周和正常组织较少表达。说明胰腺癌细胞含有大量iNOS以促进肿瘤血管形成。各临床分期组和病理分级组中iNOS的表达无明显差异，而转移组iNOS表达较未转移组明显增高，说明iNOS的表达与淋巴结转移有关，提示iNOS可能通过某种机制促进淋巴管生长，导致淋巴结转移的发生。 目前发现在许多肿瘤组织内有大量的巨噬细胞浸润。本研究显示胰腺癌组织中有大量肿瘤相关巨噬细胞(TAMs)浸润，主要位于胰腺癌的间质中。各临床分期组和病理分级组中TAMs的表达均有明显差异，而且转移组TAMs计数均值也明显高于未转移组，说明TAMs与胰腺癌的分化转移有密切关系。TAMs也可能分泌促进肿瘤生长和转移的因子，参与肿瘤的生长和转移。TAMs计数越高，可能胰腺癌分化越低，越易发生转移。 本研究还发现胰腺癌中iNOS的表达与TAMs计数呈密切正相关关系，提示iNOS的分泌与TAMs的浸润有着密切的关系，且均与胰腺癌的转移有关。而且有研究证实iNOS是TAMs浸润的诱导趋化因子。可能是癌细胞产生iNOS促进血管新生，诱导TAMs浸润，TAMs也产生iNOS促进肿瘤生长。但在胰腺癌中TAMs是否产生iNOS尚需进一步研究。本研究还发现TAMs的表达与胰腺癌的分期分级有关，iNOS的表达与胰腺癌的分期分级无关，说明iNOS和TAMs的表达是不完全相同的，可能还分别与其它因子的作用有关，而TAMs在胰腺癌的分化和转移可能会更为重要。在今后探索胰腺癌的治疗时抑制TAMs的浸润可能是一个有意义的方向。 结论： iNOS和TAMs的表达均与胰腺癌的淋巴结转移有密切关系，而且二者之间也存在密切联系。iNOS的表达与胰腺癌的分期分级无关，而TAMs的表达与胰腺癌的分期分级有关，说明TAMs在胰腺癌的分化和转移可能更为重要。

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综述 一氧化氮在肿瘤血管生成及消化道肿瘤中的作用

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