肉桂黄酮类抗氧化活性成分的HPLC法识别及其成分分析

摘要

肉桂（Cinnamomum cassia Presl），又名玉桂，是一种樟科（Lauraceae）樟属（Cinnamomum）乔木植物。原产于中国，主要分布在广西、广东、云南等地，另外，国外的斯里兰卡、越南等地也有盛产。肉桂因具有特殊的香味而常被用作食品调味料，亦可作药用，具有散寒止痛、温经通脉等多种功效，是一种纯天然的药食两用植物资源。研究结果表明，肉桂中具有多种类型的成分，如：挥发油、二萜、黄烷醇及其多聚体化合物、黄酮及其苷类、多糖、木质素等。目前，对于肉桂的研究以挥发油为主，而对其中的黄酮类化合物的研究较少。黄酮类化合物是发挥抗氧化作用的主要成分，因而通过对肉桂中的化学成分及其抗氧化活性等相关研究，可进一步了解肉桂这种天然资源的开发利用价值。
　　本课题主要包括以下四个部分：
　　（1）利用超声-微波协同提取仪提取肉桂黄酮类化合物，通过单因素实验筛选出影响提取率的显著因素，并采用响应面法对提取工艺进行优化，得到最佳工艺条件为：乙醇体积分数72％，液料比28:1，萃取温度66℃，微波功率300 W，萃取时间6 min，超声功率50 W。在此条件下，肉桂黄酮的得率为5.62%，纯度为26.46%。
　　（2）通过静态纯化法得到D101和NKA-9两种大孔树脂的吸附曲线，选择吸附量更大的D101大孔树脂作为后续进行动态大量纯化的载体。采用动态纯化法确定最佳条件为：上样液浓度1.0 mg/mL、样品液吸附流速为2 BV/h、洗脱流速为3 BV/h、乙醇洗脱剂为70%。经纯化后采用分光光度法显色测定并计算得到肉桂黄酮纯度从纯化前的26.46%增加到49.26%，肉桂黄酮的纯化得率为21.5%。通过制备色谱对经大孔树脂纯化后的肉桂总黄酮作进一步的纯化分离并得到两个组分。
　　（3）采用Agilent G6410A液相色谱串联质谱技术，对肉桂总黄酮成分进行了定性及定量分析。通过与标准品的保留时间及特征碎片进行比对，鉴定出7种黄酮类物质，分别为没食子酸（4.36μg/mg）、原花青素B2（112.55μg/mg）、表儿茶素（75.95μg/mg）、原儿茶醛（7.10μg/mg）、芦丁（5.30μg/mg）、金丝桃苷（0.54μg/mg）、鞣花酸（7.25μg/mg）。又根据碎片离子、裂解规律及相关文献推断出5种物质，分别为A型原花青素二聚体（1.17μg/mg）、A型原花青素三聚体（34.95μg/mg）、没食子酰基-鞣花酰基葡萄糖（101.83μg/mg）、槲皮素-3-葡萄糖醛酸苷（0.86μg/mg）、槲皮素-3-O-木糖苷（1.41μg/mg）。
　　（4）采用传统分光光度法和细胞模型法评价了经制备色谱分离纯化的肉桂黄酮两组分的抗氧化活性，并与同浓度的两种食品加工中常用的抗氧化剂Vc和PG作了比较。结果表明，肉桂黄酮两组分在清除超氧阴离子自由基方面能力强于PG，在抑制卵黄脂蛋白脂质过氧化能力上优于Vc。且组分1清除其他几种自由基的活性都强于组分2。在细胞模型抗氧化实验中，肉桂黄酮两组分在浓度范围为1-100μg/mL内几乎无细胞毒性，且肉桂黄酮组分1比组分2具有更好的细胞内抗氧化活性。此外，采用HPLC-DPPH、HPLC-OH法识别出肉桂总黄酮中的抗氧化活性较强的成分为原花青素B2、没食子酸、表儿茶素。

目录

声明

第一章 前 言

1.1 肉桂的研究概述

1.2 黄酮类化合物的概述

1.3 肉桂黄酮类化合物的研究目的及意义

1.4 本课题要解决的问题

第二章 肉桂总黄酮的超声-微波协同提取

2.1 引言

2.2 实验材料与仪器

2.3 实验方法

2.4 实验数据的处理

2.5 结果与讨论

2.6 实验小结

第三章 肉桂黄酮的纯化工艺研究

3.1 引言

3.2 实验材料与仪器

3.3 实验方法

3.4 结果与讨论

3.5 实验小结

第四章 肉桂黄酮类成分的定性及定量分析

4.1 引言

4.2 实验材料与仪器

4.3 实验方法

4.4 结果与讨论

4.5 实验小结

第五章 肉桂黄酮的抗氧化性质及其活性成分的识别

5.1 引言

5.2 实验材料与仪器

5.3 实验方法

5.4 结果与讨论

5.5 实验小结

第六章 结论与展望

参考文献

发表论文及参加科研情况说明

致谢