5-杂氮胞苷对成人T淋巴细胞穿孔素基因启动子区域甲基化水平的影响

摘要

目的：研究DNA低甲基化对穿孔素基因mRNA和蛋白表达的影响。 方法：(1)密度梯度离心分离正常成人的外周血淋巴细胞，磁珠分离CD4<'+>和CD8<'+>细胞后进行细胞培养，DNA甲基化抑制剂5-杂氮胞苷(5-azaC)处理。(2)分别提取DNA、RNA和蛋白质。(3)亚硫酸氢钠处理DNA，巢式PCR进行扩增、转化入大肠杆菌，挑取克隆测序。(4)实时定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测穿孔素mRNA的表达，Western-blot检测穿孔素蛋白量的变化。 结果：(1)5-azaC处理后的CD4<'+>细胞和CD8<'+>细胞穿孔素mRNA和蛋白表达显著高于未处理的CD4<'+>和CD8<'+>细胞组(P<0.05)。(2)测序结果表明5-azaC处理后的CD4<'+>细胞和CD8<'+>细胞DNA穿孔素启动子区域的甲基化水平降低，与未处理的CD4<'+>和CD8<'+>细胞组比较(P<0.05)有显著性差异。 结论：5-azaC处理后CD4<'+>和CD8<'+>细胞穿孔素mRNA的表达和蛋白的表达都有显著的增高，这种增高与CD4<'+>和CD8<'+>细胞穿孔素基因启动子区域出现的低甲基化有关。

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T细胞DNA低甲基化在SLE发病中的作用研究进展

致谢

附录（攻读学位期间主要的学术成果）