鸡生长与免疫抑制综合征病毒单克隆抗体的制备和免疫组化法的建立

摘要

将鸡生长与免疫抑制综合征病毒(Chickenstuntandimmunosupressionsyndromevirus,CSISV)尿囊腔接种SPF鸡胚繁殖病毒,用差速离心法纯化病毒,用纯化的病毒免疫雌性Ba1b/c小鼠。免疫后小鼠的脾脏细胞与NSO骨髓瘤细胞在PEG-1500的诱导下进行融合,融合率达96.88％,阳性率为4.84％。经过间接ELISA的筛选和有限稀释克隆,获得了一株能分泌CSISV抗体的杂交瘤细胞-3H10。经间接ELISA测定,3H10细胞上清的效价为1:320,用3H10细胞制备的小鼠腹水效价为1:8.2×106。经连续传代、冻存、复苏,3H10杂交瘤细胞株能稳定分泌抗体(3H10-McAb)。
　　 用捕获ELISA法对3H10—McAb的亚类鉴定为IgG2a;用间接ELISA法对3H10-McAb进行了特异性鉴定,结果显示,3H10—McAb不与空白尿囊液发生反应,也不与:[BDV、NDV、IBV等病毒发生交叉反应；Western-blot试验证明3H10-McAb能与CSISV病毒p30蛋白发生特异反应。
　　 用制备的单克隆抗体,以单抗1:80稀释,4℃过夜；二抗1:30稀释,37℃下作用30min；DAB显色5分钟；Harrys苏木素1:5稀释后,复染25s为最佳条件。建立了HRP标记的免疫组化法,检测到人工感染CSISV的肉仔鸡肝脏和肾脏均为阳性,表明3H10—McAb能与组织中的病毒良好结合,能有效检测到感染组织中的CSISV。
　　 CSISV单克隆抗体的成功制备,为建立该病的免疫学诊断方法奠定了基础,也为进一步研究该病奠定了良好的基础。