Survivin、p53和PCNA在脑膜瘤中的表达及相关性研究

摘要

目的： 肿瘤的发生被认为是受多基因协调控制的细胞增殖和细胞凋亡过程失衡的结果。细胞凋亡受到凋亡促进基因(如bax)和凋亡抑制基因(如bcl-2)作用的控制。Survivin基因是一个凋亡蛋白抑制家族的新成员，通过抑制效应caspase分子来抑制细胞凋亡途径。Survivin蛋白在人类大多数恶性肿瘤如淋巴细胞瘤、肺癌、胰腺癌、乳腺癌、胃癌、结肠癌和前列腺癌中都有明显的高表达。并且抗survivin主动免疫反应可能发生的证据也逐渐增多。p53是明确的抑癌基因，PCNA(增殖细胞核抗原)是肿瘤细胞增殖活动可靠的标志物。脑膜瘤是中枢神经系统最常见的肿瘤之一，surivin、p53和PCNA在脑膜瘤中表达的相关性、survivin能否作为脑膜瘤免疫治疗的靶基因尚未见报道。本文通过检测survivin、p53和PCNA蛋白在脑膜瘤中表达情况，应用统计学分析，探讨三者与脑膜瘤临床病理类型的相关性以及三者在脑膜瘤中表达的相关性，进一步明确它们在脑膜瘤发生、增殖、恶变和复发中的作用，也试图提供survivin可以作为脑膜瘤一种新的较好的诊断标志物和理想的有希望的免疫治疗靶向基因的理论依据。 方法： 选取河北医科大学第二医院神经外科2000年1月至2006年5月手术切除的97例脑膜瘤标本及存档蜡块。其中男性45例，女性52例；年龄15～76岁，平均50.7±10.6岁，病程3～26个月。97例脑膜瘤标本中原发脑膜瘤86例，复发脑膜瘤11例，其中位于大脑镰旁21例，大脑凸面22例，蝶骨嵴12例，蝶鞍旁3例，小脑幕3例，前颅窝13例，后颅窝15例，其它部位8例。病历资料、手术前后放射影像学资料、病理资料均完整，术前均未经过化疗、放疗和免疫治疗。18例同期因急性颅脑损伤颞肌下减压术切除的正常脑膜作为对照组。所有标本均经过10％甲醛固定，常规脱水，石蜡包埋后存档备用。每例标本以4μm厚度连续切片，并作HE染色确定病理组织类型。采用链霉菌抗生物素-过氧化酶连接(SP)免疫组织化学方法对97例脑膜瘤组织和18例正常脑膜组织中survivin、p53和PCNA单克隆抗体的表达进行检测。严格按照试剂盒说明书操作。阳性病理组织切片随机选择5个高倍视野(400x)，每个视野计数200个肿瘤细胞，计算1000个肿瘤细胞中survivin、p53或PCNA蛋白的阳性表达率。免疫反应按照下述标准判定：阳性细胞数O为阴性(-)；阳性细胞数<30％为(+)；阳性细胞数30～50％为(++)，阳性细胞数≥50％为(+++)。选择肿瘤细胞标记密集的区域评估PCNA LI，PCNA-LI为阳性染色细胞数在1000个肿瘤细胞中所占的比例(每张切片选取10个高倍视野，每个视野计数100个肿瘤细胞)。本研究所有统计分析用SPSS11.0 for Windows软件包进行。应用X<'2>检验、Mann-Whitney U法、方差分析-q检验、Spearman等级相关分析对本报告结果进行比较。所有检验结果p<0.05认为有统计学意义。 结果： 根据WHO分级标准，脑膜瘤Ⅰ级60例，Ⅱ级21例，Ⅲ级16例。在所有病例中，survivin免疫反应位于细胞浆，p53和PCNA免疫反应在细胞核。在阳性肿瘤细胞中Survivin、p53和PCNA免疫组化反应呈现黄色、淡黄色、或棕黄色颗粒。 Survivin、p53和PCNA蛋白在脑膜瘤中的表达和患者年龄、性别、肿瘤大小以及生长部位无显著相关性(P>0.05)。 初发组和复发组脑膜瘤阳性表达率分别为：survivin61.6％和100％；p53 20.9％和81.8％；PCNA51.2％和90.9％。复发组SUrvivin、p53和PCNA蛋白阳性表达率均明显高于初发组(P<0.05)。 Survivin在正常脑膜和脑膜瘤组织中表达阳性率为0％和65.9％，差异具有显著性(P<0.001)。Survivin蛋白表达阳性率在脑膜瘤Ⅰ级、Ⅱ级、Ⅲ级分别为51.7％(31/60)、85.7％(18/21)、93.8％(15/16)，随着病理级别升高而升高，并和脑膜瘤病理级别显著相关性(P<0.01)。Survivin蛋白表达阳性率脑膜瘤Ⅱ级明显高于Ⅰ级(P<0.001)；脑膜瘤Ⅲ级明显高于Ⅰ级(P<0.001)。脑膜瘤Ⅱ级同脑膜瘤Ⅲ级之间无显著性差异(P>0.05)。 p53在正常脑膜和脑膜瘤组织中表达阳性率为0％和27.8％(27/97)，差异均具有显著性(P<0.05)。p53蛋白表达阳性率在脑膜瘤Ⅰ级、Ⅱ级、Ⅲ级分别为13.3％(8/60)、 +38.1％(8/21)、68.8％(11/16)，随着病理级别升高而升高，并和病理级别显著相关(P<0.01)。p53蛋白在脑膜瘤Ⅰ级、Ⅱ级和Ⅲ级不同病理分化之间的差异均具有显著性(P<0.001)。 PCNA蛋白在正常脑膜和脑膜瘤组织中表达阳性率为0％和55.7％(54/97)，差异具有显著性(P<0.001)。PCNA蛋白表达阳性率在脑膜瘤Ⅰ级为41.7％(25/60)，Ⅱ级为71.4％(15/21)，Ⅲ级为87/5％(14/16)，随着病理级别升高而上升，并和病理级别显著相关(P<0.01)。非参数秩和检验显示脑膜瘤Ⅱ级同Ⅰ级之间的差异具有显著性(P<0.01)；脑膜瘤Ⅲ级同Ⅰ级之间的差异有极显著性(P<0.001)。脑膜瘤Ⅱ级同Ⅲ级之间的差异无显著性意义(P>0.05)。PCNA在脑膜瘤Ⅰ级、Ⅱ级、Ⅲ级中的标记指数为15.48±21.13，38.14±27.78．57.69±35.07，随着脑膜瘤组织级别的升高而升高，在脑膜瘤各级之间差异具有显著性意义(P<0.001)。脑膜瘤中survivin与p53蛋白表达，Survivin与PCNA蛋白表达，p53和PCNA蛋白表达均呈正相关关系(r<,s>=0.451，0.640，0.625，P<0.01)。 结论： ①Survivin，PCNA和p53蛋白在脑膜瘤中广泛表达并和脑膜瘤的组织级别密切相关。②Survivin、p53和PCNA在脑膜瘤中的表达存在正相关性，影响和促进脑膜瘤发生、增殖、恶变和复发。③Survivin过度表达是脑膜瘤发生的早期或初始事件，可以作为判断脑膜瘤发生或复发的早期诊断指标。④Survivin是脑膜瘤免疫治疗理想的靶基因，为脑膜瘤(包括术后残余和复发脑膜瘤)的治疗提供新的思路和有效方法。

目录

摘要

前言

材料与方法

结果

附图

附表

讨论

结论

参考文献

综述：脑膜瘤中Survivin、p53和PCNA研究进展

致谢

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