日粮不同蛋白水平对绵羊脂肪和肌肉中IGF-Ⅰ和FAS基因表达的影响

摘要

选择年龄1-1.5岁、体重50Kg左右的杂交母羊(萨福克♂×小尾寒羊♂)24只，随机分为A组(低蛋白组)、B组(中蛋白组)、C组(高蛋白组)3组，每组8只。B组，按照中国肉羊饲养标准(NY/T816-2004)中的蛋白需要量设计日粮饲喂，蛋白为150g，d，A组和C组处理是在中等蛋白水平的基础上分别减少或增加25％。饲喂50天后手术取绵羊腹部皮下脂肪组织、肠系膜脂肪组织和半腱肌，提取总RNA，通过优化反应条件和体系，采用半定量RT-PCR方法对类胰岛素生长因子-I(IGF-I)、脂肪酸合成酶(FAS)基因在腹部皮下脂肪组织、肠系膜脂肪组织及半腱肌三个组织中的相对表达量进行了检测。同时分析了三个蛋白水平日粮对绵羊FAS mRNA、IGF。I mRNA相对表达量的影响。试验结果如下: 1.利用比色法试剂盒逐只测定绵羊血清尿素氮，高蛋白组、中蛋白组和低蛋白组绵羊血清尿素氮分别为41/.9士4.10mg/100ml、38.25+2.02mg/100mL和22.02±1.88m/00mL。日粮高蛋白组和中蛋白组血清尿素氮显著高于低蛋白组(P<0.05)，蛋白组高于中蛋白组但差异不显著(P>0.05)。 2.日粮的蛋白质水平影响绵羊腹部皮下脂肪、肠系膜脂肪和半腱肌组织IGF-I基因的表达，随着日粮蛋白质水平的升高，IGF-I表达量增加；且表达具有组织特异性，在腹部皮下脂肪、肠系膜脂肪中，三个蛋白水平组之间相对表达量差异显著(P<0.05)，低蛋白组与高蛋白组差异极显著(P<0.01)。在半腱肌组织中，高蛋白组IGF-I表达量极显著高于低蛋白组(P<0.01)，而中蛋白组IGF.I表达量与高蛋白组和低蛋白组间差异均不显著(P>0.05)。 3.日粮的蛋白质水平影响绵羊腹部皮下脂肪、肠系膜脂肪和半腱肌肌内脂肪FAS基因的表达，随着日粮蛋白质水平的升高FAS表达量降低，且表达具有组织特异性。在腹部皮下脂肪、肠系膜脂肪中FAS mRNA丰度，中蛋白组和低蛋白组差异不显著(P>0.05)，高蛋白组显著低于中蛋白组和低蛋白组(P<0.05)。在半腱肌肌内脂肪中FAS mRNA丰度，中蛋白组与高蛋白组和低蛋白组差异显著(P<0.05)，高蛋白组极显著低于低蛋白组(P<0.01)。 5.在日粮中等蛋白水平，肠系膜脂肪组织、皮下脂肪组织IGF-I基因表达差异不显著(P>0.05)，但都极显著的高于半腱肌(P<0.01)。FAS基因在肠系膜脂肪组织、皮下脂肪组织表达差异显著(P<0.05)，且两个组织表达量都极显著高于半腱肌肌内脂肪(P<0.01)。

目录

文摘

英文文摘

声明

1引言

1.1类胰岛素生长因子-Ⅰ(IGF-Ⅰ)基因的研究进展

1.1.1胰岛素样生长因子(IGFs)的概念

1.1.2 IGFs的生物学基础

1.1.3 IGF-Ⅰ的生物学功能

1.1.4营养对IGF-Ⅰ基因表达调控

1.2脂肪酸合成酶(FAS)基因的研究进展

1.2.1 FAS的概念及生物学基础

1.2.2 FAS的生物学功能

1.2.3营养素对动物FAS基因表达的影响

1.2.4动物不同生长阶段FAS基因的表达

1.2.5 FAS基因表达与动物体内脂肪沉积

1.3研究目的和意义

2材料与方法

2.1试验材料

2.1.1试验材料与试验地点

2.1.2试验设计与日粮组成

2.1.3试验羊的饲养与管理

2.1.4样品的采集与制备

2.1.5主要试剂

2.1.6主要仪器

2.1.7溶液的配制

2.2试验方法

2.2.1血清尿素氮的测定

2.2.2总RNA的提取和质量控制

2.2.3 RNA的反转录

2.2.4 PCR引物设计

2.2.5 PCR条件的优化

2.2.6电泳及mRNA的丰度分析

2.3试验数据分析

3结果与分析

3.1日粮不同蛋白水平对绵羊血清尿素氮的影响

3.2样品总RNA的质量

3.3 PCR条件优化

3.3.1退火温度与Mg2+浓度

3.3.2循环次数的确定

3.3.3引物对之间的竞争反应

3.3.4阳性对照和阴性对照

3.4半定量RT-PCR结果

3.4.1绵羊不同组织中IGF-Ⅰ基因表达的差异

3.4.2绵羊不同组织组织中FAS基因表达的差异

3.4.3绵羊不同组织中IGF-Ⅰ、FAS基因表达的差异

4讨论

4.1脂肪组织总RNA的提取

4.2 PCR条件的优化

4.2.1 PCR反应退火温度

4.2.2 Mg2+的浓度

4.2.3循环圈数

4.2.4内标的选择

4.3日粮不同蛋白水平对绵羊血清尿素氮的影响

4.4蛋白水平对绵羊脂肪和肌肉中IGF-Ⅰ基因表达的影响

4.5蛋白水平对绵羊脂肪和肌肉中FAS基因表达的影响

4.6绵羊不同组织中IGF-Ⅰ、FAS基因表达的差异

有待于进一步解决的问题

结论

参考文献

在读期间发表的学术论文

发表论文一

发表论文二

作者简介

致谢