地塞米松对人眼小梁细胞RhoGDI和RhoA蛋白表达的影响

摘要

目的： 目前原发性开角型青光眼的确切病因仍然不明。小梁网作为房水流出的通路，是房水排出的主要阻力部位，也是开角型青光眼的主要病理部位。小梁细胞结构和功能的变化可能影响房水引流的效率，细胞内相关蛋白的表达变化，可能是开角型青光眼发病机理的分子基础，也是当前科学研究的热点问题之一。本研究选用体外培养永生化的人眼小梁细胞株，将不同浓度的地塞米松作为激素性处理因素，观察不同处理时间细胞形态和生长状态的变化，同时应用分子生物学方法检测细胞内Rho GTP酶活性调节蛋白RhoGDI及其效应物之一RhoA蛋白的表达和变化，旨在认识地塞米松处理下人眼小梁细胞生长增殖和功能活性的变化，并进一步探讨细胞内分子水平的改变，为开角型青光眼的发病机理提供新思路，也为其预防和治疗措施提供新方向。 方法： 用含15﹪小牛血清的DMEM／F12培养基常规培养永生化人眼小梁细胞株，倒置相差显微镜下观察细胞形态和地塞米松处理后的变化。采用MTT比色法检测10<'-6>M和10<'-7>M地塞米松处理1-5天的小梁细胞与对照组相比生长增殖的变化，并分别绘制两种浓度处理组和对照组细胞的生长曲线。免疫细胞化学方法检测小梁细胞内RhoGDI蛋白的表达和地塞米松处理后的变化。免疫印记法检测小梁细胞内RhoGDI和RhoA分子的表达和地塞米松处理后的表达差异，并进一步摸索10<'-5>M、5*10<'-6>M、10<'-6>M、5*10<'-7>M和10<'-7>M地塞米松处理24小时的小梁细胞内RhoGDl分子表达的变化趋势。 结果： 成功体外培养永生化人眼小梁细胞株，显微镜下地塞米松处理的小梁细胞形态与对照组相比并无明显变化。MTT比色法绘制小梁细胞生长曲线结果显示，10<'-6>M和10<'-7>M地塞米松处理2-3天抑制细胞生长增殖，前者抑制作用更明显。免疫印记法结果显示小梁细胞内有RhoGDI和RhoA蛋白分子表达，地塞米松处理组的细胞与对照组相比RhoGDl分子表达减少，RhoA分子表达增加。各种浓度地塞米松均抑制细胞内RhoGDl分子表达，浓度越高抑制作用越强。免疫细胞化学法结果显示小梁细胞RhoGDl分子表达阳性，地塞米松处理的细朐表达减小。 结论： 地塞米松抑制人眼小梁细胞的生长增殖活力。小梁细胞内有RhoGDI蛋白和RhoA蛋白分子表达，地塞米松能够下调RhoGDI蛋白的表达，同时上调RhoA蛋白的表达，前一种作用随浓度增高呈现增强趋势。小梁细胞内Rho GTP酶及其调节蛋白的变化可能参与开角型青光眼的发病过程，但其问的确切机制，尚有待进一步研究。

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