CYC基因在蓝猪耳中的功能研究

摘要

CYC（Cycloidea）是高等植物中控制开花对称性的关键基因。通过研究CYC基因的功能，经基因工程方法定向改变花瓣形状，对园艺花卉的品质改良以及改变植物传粉方式都具有重要意义。因此，本论文对CYC基因在蓝猪耳中的功能进行了研究，主要研究结果如下：
　　 1.）为了研究CYC基因的功能，以及探明其对植物开花对称性形成的影响，本论文将构建的1个融合抑制子沉默表达载体35s：：CYC-SRDX及由中科院上海植生所罗达教授提供的来源于百脉根和金鱼草的五个超表达载体转入蓝猪耳。
　　 2）将这种融合抑制子沉默表达载体及由中科院上海植生所提供的LjCYC1-GFP、LjCYC2-GFP、CFP-LjCYC2、35s：：CFP-AnCYC、35s：：AnCYC-YFP分别对蓝猪耳进行了转化；并通过PCR扩增进行了转基因鉴定，成功获得了相应的转化株系。
　　 3）对蓝猪耳转化株系的研究表明，转化LjCYC1-GFP、LjCYC2-GFP、CFP-LjCYC2、35s：：CFP-AnCYC、35s：：AnCYC-YFP五种超表达载体的株系表型与野生型无明显差异，而转35s：：CYC-SRDX抑制载体的株系的花较野生型的要小，每个花瓣的形状也都与野生型的不同，在35s：：CYC-SRDX转化株系中，花的背部花瓣与侧部花瓣形状相似；35s：：CYC-SRDX转化株系的花色变浅，花瓣上的紫色区域减少；花筒变长；花萼变长；雄蕊花药褐黄，离生；叶片边缘向背面卷曲。
　　 4）通过琼脂糖印迹法可以看出35s：：CYC-SRDX转化株系的表皮细胞比野生型的细胞要大，且在35s：：CYC-SRDX转化株系中，背部花瓣和侧部花瓣不仅形状相似，而且细胞类型也相似。

目录

文摘

英文文摘

缩写词表

1 引言

1.1 文献综述

1.1.1 蓝猪耳的简介

1.1.2 控制开花对称性的研究

1.1.3 融合抑制子沉默技术

1.2 本论文课题的理论和实际应用意义

2 材料与方法

2.1 实验材料

2.1.1 植物材料

2.1.2 工具酶、试剂及试剂盒

2.2 实验方法

2.2.135s：：CYC-SRDX抑制载体的构建

2.2.2 根癌农杆菌工程菌种的制备

2.2.3 组织培养

2.2.4 遗传转化

2.2.5 转基因植株的鉴定

2.2.6 蓝猪耳表皮细胞大小及数目的测定

3 结果与分析

3.1 农杆菌介导的蓝猪耳叶片外植体的遗传转化

3.1.1 蓝猪耳的培养及遗传转化

3.1.2 来自豆科植物百脉根的LjCYC基因转化蓝猪耳所得转基因植株的表现观察

3.1.3 转基因蓝猪耳的PCR检测

3.1.4 来自玄参科科植物金鱼草的AnCYC基因转化蓝猪耳所得转基因植株的表现观察

3.1.5 转基因蓝猪耳的PCR检测

3.235s：：CYC-SRDX抑制载体的构建

3.2.1 目的片段的PCR扩增

3.2.2 目的片段克隆到SRDX载体

3.2.3 农杆菌工程菌种的获得

3.2.435s：：CYC-SRDX转化蓝猪耳所得转基因植株的表现观察

3.2.5 转基因蓝猪耳的PCR检测

3.2.635s：：CYC-SRDX转化蓝猪耳花表皮细胞的观察

4 讨论

4.1 超表达载体在蓝猪耳中的没有表型的原因分析

4.2 融合沉默抑制子在蓝猪耳中的作用

4.3 转基因植株花表皮细胞的观察

参考文献

致谢