超声联合微泡造影剂对人肝癌细胞株HepG2生物学效应实验研究

摘要

目的：观察超声联合微泡造影剂对HepG2细胞增殖、超微结构改变、细胞膜通透性、DNA的损伤程度、VEGF和PCNA表达的影响，探讨超声联合微泡造影剂对HepG2的生物学效应及可能机制，为微泡造影剂用于肝癌治疗寻找理论根据及潜在价值。 方法：细胞分为单纯细胞对照组(Con，HepG2+PBS)、单纯超声照射组(Ult，HepG2+PBS+超声)、单纯微泡组(Mic，HepG2+微泡)、超声微泡组(Ult—Mic，HepG2+微泡+超声)。(1)固定超声强度为0．5w／cm2，超声微泡组(Ult—Mic)设四组，微泡浓度分别为2．5％、5％、10％、20％；固定微泡浓度为5％，超声微泡组(Ult—Mic)设四组，超声强度分别为0．25w／cra2，0．5w／cm2、1w／cm2、2w／cm2；用MTT检测对HepG2细胞增殖作用。(2)固定超声强度0．5w／cm2，微泡浓度为5％、10％，电镜观察细胞超微结构。(3)固定微泡浓度为5％，超声强度为0．5w／cm2；通过荧光染色观察细胞膜通透性，免疫组化检测VEGF、PCAN表达，DNA梯度电泳(DNAladder)和单细胞凝胶电泳(SCGE)检测对细胞DNA的损伤。 结果：(1)固定超声强度为0．5w／cm2，微泡浓度为5％、10％、20％时超声微泡组HepG2抑制率随微泡浓度的增加而提高；固定微泡浓度为5％，超声强度为0．5w／cm2、1w／cm2、2w／cm2时超声微泡组HepG2抑制率随超声强度的增加而提高。而单纯超声和单纯微泡组HepG2没有明显抑制作用。(2)固定超声强度0．5w／cm2，微泡浓度为5％、超声微泡组细胞超微结构没明显变化，而微泡浓度为1O％时，可见超微结构的改变，包括线粒体的肿胀，核碎裂，细胞膜损害，细胞器溢出胞外。而单纯超声组和单纯微泡组都没有超微结构的变化。(2)固定微泡浓度为5％，超声强度为0．5w／cm2，超声微泡组细胞膜通透性增加，PCAN表达减少，而VEGF没有明显变化，DNA梯度电泳没有明显变化而单细胞凝胶电泳检测到DNA轻度损伤，单纯微泡组和单纯超声组都没有明显变化。 结论：超声联合微泡造影剂在一定微泡浓度和超声强度下产生一系列生物学效应，抑制HepG2细胞的增殖，细胞膜通透性增加，PCAN表达减少，DNA轻度损伤，超微结构改变，这些基础理论提示超声微泡造影剂用于肝癌的治疗具有潜在的价值。

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