运用T7噬菌体展示技术筛选乙型肝炎病毒PreS1相互作用蛋白的实验研究

摘要

目的：构建含乙型肝炎病毒(HBV)Presl基因的原核表达载体并在大肠杆菌中高效表达，获得纯化的Presl融合蛋白，并对其性质进行鉴定，为进一步从人肝细胞cDNA表达文库中筛选Presl相互作用蛋白奠定基础。 方法：采用PCR法扩增含HindlII与XbaⅠ酶切位点的Presl基因片段，原核表达载体pGST-MOLUC及PCR产物经双酶切后，用T4DNA连接酶将两者连接并转化到大肠杆菌JM109构建并筛选重组质粒。随后将重组质粒转入表达宿主菌BL21感受态细胞，经IPTG诱导表达，对表达蛋白进行SDS-PAGE电泳分析和Western-blot检测。以谷胱甘肽—Sepharose4B凝胶为填料进一步采用亲和层析纯化融合蛋白。 结果：用PCR方法扩增出与预期大小一致的目的基因片段。重组质粒经双酶切鉴定及测序分析证实重组质粒克隆成功，命名为pGST-Presl。转化表达宿主菌后成功诱导出分子量为37kD的GST—Presl融合蛋白，与预期分子量相符，诱导表达融合蛋白约占总菌蛋白的1O％左右。Western-blot检测表明诱导表达的融合蛋白能分别与抗GST的单抗和抗Presl的单抗发生特异性结合。采用谷胱甘肽-Sepharose4B凝胶纯化融合蛋白，纯化蛋白纯度约为90％左右。 结论：Presl融合蛋白能够在大肠杆菌中高效表达，其纯化产物为从人肝细胞cDNA表达文库中筛选Presl相互作用蛋白奠定了基础。

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英汉缩略语名词对照

摘要

第一部分乙型肝炎病毒PreS1融合蛋白的表达、纯化及性质鉴定

第二部分从人肝细胞cDNA噬菌体表面展示文库中筛选PreS1相互作用蛋白

参考文献

文献综述 噬菌体表面展示技术的研究进展

致谢

攻读学位期间发表的学术论文