预防幽门螺杆菌感染的蛋黄抗体的研制

摘要

目的：采用基因工程技术大量表达重组幽门螺杆菌(Helicobacterpylori，H．pylori)鞭毛粘附素(HpaA)，用此重组蛋白作为抗原，制备高效价的抗HpaA的鸡蛋黄抗体IgY，为研制H．pylori预防性抗体制剂奠定基础。 方法： 1．诱导重组质粒pQE30-hpaA在大肠杆菌DH5a中表达rHpaA，SDS-PAGE分析其表达形式。 2．重组蛋白经Ni2+-NTA树脂纯化后，采用Bradford法测定蛋白浓度。 3．用rHpaA免疫30周龄立克体鸡，以水稀释法联合盐析法提取HpaA-IgY，纯化浓缩后用Bradford法测定其含量，SDS-PAGE电泳检测纯度，Westernblot鉴定抗原特异性。 4．ELISA测定效价和巴氏消毒后的活性。 结果： 1．SDS-PAGE电泳显示pQE30-hpaA-DH5a表达产物相对分子量为30000。 2．SDS-PAGE分析表达形式，rHpaA主要存在于细菌裂解液上清中，约占70％，部分存在于包涵体中，经Ni2+_NTA树脂对上清进行纯化后，纯度约为90％，Bradford法测得蛋白质含量为0．95mg/ml。 3．HpaA-IgY提纯后，Bradford法测得含量为24．6mg/m1，纯度约为90％，Westernblot显示在相对分子量30000处出现单一条带，ELISA效价为l：l2800。 4．巴氏消毒后未见效价损失。 结论：成功获得了高浓度、高纯度、较高效价、耐巴氏消毒的特异性IgY，为进一步进行体内外实验奠定了基础。

目录

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英汉缩略语名词对照

第一部分抗幽门螺杆菌rHpaA蛋黄抗体的制备摘要

第一部分抗幽门螺杆菌rHpaA蛋黄抗体的制备英文摘要

第一部分抗幽门螺杆菌rHpaA蛋黄抗体的制备前言

第一部分抗幽门螺杆菌rHpaA蛋黄抗体的制备 材料与方法

第一部分抗幽门螺杆菌rHpaA蛋黄抗体的制备 结果

第一部分抗幽门螺杆菌rHpaA蛋黄抗体的制备 讨论

第一部分抗幽门螺杆菌rHpaA蛋黄抗体的制备 小结

第一部分抗幽门螺杆菌rHpaA蛋黄抗体的制备 参考文献

第二部分rHpaA-IgY预防幽门螺杆菌感染的体内外研究 摘要

第二部分rHpaA-IgY预防幽门螺杆菌感染的体内外研究 英文摘要

第二部分rHpaA-IgY预防幽门螺杆菌感染的体内外研究 前言

第二部分rHpaA-IgY预防幽门螺杆菌感染的体内外研究 材料与方法

第二部分rHpaA-IgY预防幽门螺杆菌感染的体内外研究 结果

第二部分rHpaA-IgY预防幽门螺杆菌感染的体内外研究 讨论

第二部分rHpaA-IgY预防幽门螺杆菌感染的体内外研究 参考文献

全文总结

文献综述脓肿分支杆菌分子生物学鉴定的研究进展

致谢

硕士期间发表的文章