枯草杆菌血栓溶解酶的液体发酵及分子修饰研究

摘要

本论文以稻草中分离的枯草杆菌SBS为出发菌株，以枯草杆菌血栓溶解酶(Bacillus Thrombolytic enzyme，以下简称BTE)为研究对象，研究了BTE产生的液体发酵工艺以及BTE的分离和纯化并对BTE分子进行了聚乙二醇(PEG)化修饰，以期改进其酶学性质，为今后的应用奠定基础。
　　 结果表明：通过正交实验得出的最优培养基组成(g/L)：燕麦麸皮7，可溶性淀粉3，大豆分离蛋白25，CaCl20.2。采用优化后的培养基进行了15L发酵罐的发酵试验，菌种种龄10h，接种量5％，通气搅拌，温度37℃，初始pH8.0，发酵70h后BTE酶活力达到542 IU/mL。
　　 BTE分离和纯化方法的研究结果表明：发酵液经过25％-70％硫酸铵分级沉淀、DEAE-52阴离子交换色谱和Sephadex G75凝胶过滤色谱等步骤，得到BTE纯酶，回收率为80.66％，纯化倍数为12.27，比活达到11854 IU/mg。该酶经SDS-PAGE显示为单一电泳带，分子量为32KDa。经.Fibrin-SDS-PAGE电泳检验，粗酶溶液中只有分子量为32 KDa的枯草杆菌血栓溶解酶具有溶解血纤维蛋白的能力。
　　 合成了以谷氨酸为中心分子的分枝型PEG修饰剂对BTE进行了定点修饰。实验结果显示修饰后酶的活力急剧下降，SDS-PAGE图谱条带模糊，没有达到预期的效果。