肾康注射液拮抗马兜铃酸对人近端肾小管上皮细胞的作用

摘要

研究目的： 含马兜铃酸(aristolochic acid，AA)成分的中草药能够导致慢性马兜铃酸肾病(chronic aristolochic acid nephropathy，CAAN)，病理特点为进行性寡细胞性肾间质纤维化。CAAN近年来受到广泛关注。但是，CAAN的发病机制尚未完全清楚，更缺良好治疗方法。肾康注射液(shen kang injection，SKI)是一种治疗慢性肾衰竭的复方中药注射液，它含有丹参、红花、大黄及黄芪等成分。既往实验研究表明，SKI能改善肾小球硬化和肾间质纤维化，改善肾功能，延缓慢性肾脏病的进展。本研究目的在于探讨SKI能否拮抗AA的促间质纤维化作用。 方法： 分别用四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法和乳酸脱氢酶(LDH)释放实验检测马兜铃酸钠盐(AA-Na)和(或)SKI对人近端肾小管上皮细胞(HKC)的增殖及毒性作用。用RT-PCR法检测(孵育细胞12h检测)HKC中转化生长因子-β1(transforming growth factor-β1，TGF-β1)、结缔组织生长因子(connective tissue growth factor,CTGF)、金属蛋白酶组织抑制物-1(tissue inhibitor of metalloproteinase-1，TIMP-1)以及纤溶酶原激活物抑制物-1(plasminogen activator inhibitor-1，PAI-1)的mRNA水平，ELISA法检测(孵育细胞24h检测)细胞上清TGF-βl、TIMP-l、PAl-l蛋白水平，免疫印迹法(Westernblotting)检测(孵育细胞36h检测)细胞CTGF蛋白表达。 结果： 通过MTT和LDH实验证明，10 mg／LAA-Na或(和)8 mg／ml SKI既不影响HKC增殖也无细胞毒性，故用于本实验研究。RT-PCR检测显示，10 mg／LAA-Na能显著上调HKC中TGF-βl、CTGF、TIMP-1、PAl-l的mRNA表达，分别增达1.84，1.58，1.62，1.29倍(P<0.05)；加入8mg／ml SKI后，上述TGF-βl、CTGF、TIMP-1及PAI-1 mRNA的高表达均被显著抑制，抑制率分别为41.6％，43.7％，43.8％及24.4％(P<0.05)；而SKI对上述因子mRNA表达无作用(P>0.05)。ELISA检测显示，AA-Na 10mg／L能显著上调HKC上清中TGF-βl、TIMP-1及PAI-1的蛋白质表达，分别增达1.12，1.63，1.42倍(P<0.05)；加入8mg／ml SKI后，上述TGF-β1、TIMP-1及PAl-1的蛋白质高表达均被显著抑制，抑制率分别为34.3％，43.3％及31.1％(P<0.05)；而SKI对上述因子蛋白质表达无作用(P>0.05)。Westernblotting检测显示，AA-Na 10mg／L能显著上调HKC细胞层的CTGF蛋白质表达，增达1：29倍(P<0.05)；加入8mg／ml SKI后，CTGF的蛋白质高表达被显著抑制，抑制率为21.9％(P<0.05)。8mg／ml SKI自身对HKC的TGF-β1、CTGF、TIMP-1、PAl-1 mRNA及蛋白质表达无任何效应。AA-Na能刺激HKC显著上调促细胞外基质(extracellular matrix，ECM)合成因子(TGF-β1、CTGF)及抗ECM降解因子(TIMP-1、PAI-1)的mRNA及蛋白质表达，而SKI能拮抗AA-Na的上述作用。

目录

缩略语表

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材料和方法

结果

讨论

小结

参考文献

论文综述马兜铃酸肾病的发病机制及治疗的研究进展

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