骨髓间充质干细胞复合脱细胞生物支架生物材料构建组织工程涎腺的初步研究

摘要

目的： 1．建立一种简便有效的体外分离纯化及培养扩增大鼠骨髓间充质干细胞的方法。研究MSCs的生物学特性，为涎腺组织工程提供理想的种子细胞。 2．探讨脱细胞腮腺支架材料的制备方法，制备组织工程涎腺理想的支架材料。3．评价脱细胞腮腺生物支架的生物相容性，为其在组织学应用中奠定基础。 方法： 1．贴壁培养法分离纯化大鼠MSCs体外培养和连续传代，在倒置显微镜下连续观察细胞的形态变化；测定MSCs的生长曲线，研究其生物学特征。 2．对腮腺组织进行反复冻融联合酶消化，最后冷冻干燥，观察其组织学特征。 3．观察骨髓间充质干细胞在脱细胞腮腺生物支架材料上的生长情况，描绘生长曲线，评价支架材料的生物相容性。 结果： 1．刚接种的细胞镜下呈大小较均一的圆形，胞膜清晰，胞体透亮。贴壁筛选法接种的细胞中混有较多双凹扁平状的红细胞。接种24h后可见细胞贴壁。未贴壁的细胞及粘附于贴壁细胞之上的杂细胞在换液的过程中逐渐被清除，可见贴壁生长的BMSC散在分布，开始呈圆形，部分细胞有伪足伸展，呈椭圆形、纺锤形、梭形或多角形。3d后贴壁细胞开始迅速增殖，形成细胞克隆，旋涡状排列，8d左右细胞达80%以上细胞融合。传代细胞生长迅速，约14d左右达细胞融合。 2．从原代细胞生长曲线上看出，原代培养时间潜伏期较长，一般为3～4d，8d左右进入对数生长期，14d左右进入平台期，细胞增殖速度趋于平缓。从2、6、10代细胞生长曲线上看出，传代细胞生长潜伏期只有1～2d，3～4d进入对数生长期，细胞增殖迅速，持续4～5d；7～8d进入平台期，而且随传代次数的增加，细胞的生长速度有变缓慢的趋势，至接种后第9天计算所得的细胞数目P10

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文摘

英文文摘

声明

前言

实验一 骨髓间充质干细胞分离、培养及生物学特性的研究

材料与方法：

结果

分析与讨论

实验二、脱细胞腮腺基质的制备及组织学特征观察

材料与方法

结果

讨论

实验三、BMSCs与脱细胞腮腺生物支架材料生物相容性的研究

材料与方法

结果

讨论

参考文献

致谢

骨髓间充质干细胞的研究进展