人参皂甙Rb1强化EN对POFS模型的实验研究

摘要

目的： 1.以“适量中段小肠切除-吻合术”建立稳定可靠的术后疲劳综合征（Postoperative Fatigue Syndrome POFS）实验动物模型；通过术后一般情况观察、检测学习记忆的Morris水迷宫试验、评估体力耐力的改良悬尾试验、血清白蛋白（Albumin，AL）、转铁蛋白（Transferrin，TF）、前白蛋白（Prealbumin，PA）及纤维连接蛋白（Fibronectin，FN）含量、氧自由基等评估手段超氧化物岐化酶（Superoxide Dismutase，SOD）、脂质过氧化物（lipid Peroxides，LPO）、丙二醛（Malonaldehyde，MDA）建立POFS客观的评估体系； 2.通过人参皂甙Rbl（Panaxoside Rbl，P-Rbl）强化肠内营养（Enteral Nutrition，EN）方案的对术后疲劳综合征进行干预，研究该方案对术后疲劳康复过程中的影响。 实验设计和方法： 1.实验动物SPF级SD雄性大鼠，体重（250-275g），由上海中科院实验动物中心提供（SCXK沪2007-0005）。 2.检测指标：①改良悬尾试验检测大鼠精神及体力耐力情况； ②Morris水迷宫视频分析系统测定大鼠学习及记忆重现能力； ③自发活动视频分析系统测定大鼠自主性活动情况； ④化学比色法测定白蛋白、过氧化物歧化酶、丙二醛、脂质过氧化物含量； ⑤酶联免疫吸附法（ELISA）测定转铁蛋白、纤维连接蛋白含量、IL-2； ⑥免疫浊度法测定前白蛋白含量； ⑦FACSCalibur流式细胞仪器测CD4-、CD8+细胞含量。 3.方法 分两部分进行 3.1建模： SPF级雄性SD大鼠42只，称重编号按随机区组表分为对照组（C组）、70%中段小肠切除组（70%组）、40%中段小肠切除组（40%组）、10%组中段小肠切除组（10%组）。麻醉后，沿腹白线开腹。C组：开腹，仅翻动肠襻；后3组分别切除70%、40%、10%中段小肠长度，剩余肠端行端端吻合，关腹，术后单鼠单笼饲养。术后观察一般情况、进行改良悬尾试验（Improved Tail Suspension Test，ITST）检测其体力耐力及精神状况、Morris水迷宫试验（Morris Water Maze，MWM）检测其视觉相关的学习及记忆重现能力等行为学试验，并以血清白蛋白、转铁蛋白、前白蛋白、纤维连接蛋白评价其术后营养状况，以血清SOD、MDA评价其手术创伤应激导致氧自由基改变情况。 3.2人参皂甙Rbl强化EN对POFS模型疗效及机制探讨： 60只SPF级雄性SD大鼠，按体重随机区组分对照组（Control Group，C组）、模型组（Model Group，M组）、EN+高剂量Rbl组（EN+High Dose-P-Rbl Group，EHP组）、EN+中剂量Rbl组（EN+Middle Dose-P-Rbl Group，EMP组）、EN+低剂量Rbl组（EN+Low Dose-P-Rbl Group，ELP组）。麻醉后，沿腹白线开腹，除C组外，后4组先行70%中段小肠切除-吻合术（参考第一部分实验操作），再行胃造瘘术，将内径0.3cm软硅胶管带测孔一端由胃大弯胃胃底处置入胃腔，行双荷包缝合固定，另一端由背部皮下隧道引导至肩胛间区并固定与皮肤，接输营养液装置，作胃内营养置管。关腹，术后当天禁食不禁水，单鼠单笼饲养。C组、M组予以常规饲料喂养，人参皂甙Rbl强化EN组予以肠内营养百普素及不同剂量的人参皂甙Rbl，观察术后体重等一般情况；Morris水迷宫试验测定学习与记忆重现能力、改良悬尾试验测定其体力耐力及精神状况；FACSCalibur流式细胞仪评估免疫功能CD4+、CD8+、IL2；酶联免疫吸附法（ELISA）测定转铁蛋白、纤维连接蛋白含量、白细胞介素-2（Interleukin-2，IL-2）；化学比色法测定白蛋白、过氧化物歧化酶、丙二醛、脂质过氧化物含量。 结果： 1.建模结果： 70%小肠切除组大鼠一般情况POFS表征符合程度最佳，体力、耐力下降，学习记忆能力下降，并出现一定程度的抑郁倾向（P<0.05），血清急性期蛋白水平明显下降（P<0.05），与疲劳相关的氧自由基也处于失衡状态（P<0.05）。 2.肠内营养干预的疗效及其机制的探讨结果： EHP组及EMP组在改善POFS方面效果明显，ELP组在部分指标改善显著：体重方面，除M组外各组交替上升，术后第7天都明显增加（P<0.05）。Morris水迷宫试验中，EN+Rbl能明显缩短学习潜伏期及增加准确穿越目标平台次，EHP及EMP组（P<0.01）； ELP组（P<0.05）。在改良悬尾试验中，EHP及EMP组能明显增加挣扎域上面积（P<0.05），减少单次最长静止休息时间，EHP及ELP组作用类似（P<0.05），EMP组效果突出（P<0.01）。在自发活动试验（Open Field Test，OFT）中，高剂量人参皂甙Rbl强化EN组相对M组，总路程、中央路程、活动次数、竖起修饰次数等各指标有明显好转（P<0.05）；中、低剂量人参皂甙Rbl强化EN组相对M组，以上各指标部分有好转（P<0.05）；EN+Rbl能增加转铁蛋白、前白蛋白、纤维连接蛋白血清含量（P<0.05），其中EHP能极其明显地增加纤维连接蛋白含量（P<0.01）。各治疗组能增加CD4+T细胞比例及IL-2含量（P<0.05），但对于CD8+T细胞无统计学差异（P>0.05）。EHP及EMP组能增加SOD活性减少LPO及MDA含量（P<0.05）。 结论 1.70%小肠切除-吻合术建立的大鼠动物模型，具有临床POFS的基本特点，是建立POFS动物模型的一个良好方法。适度的手术创伤是引起POFS的启动因素，也是制作该动物模型的关键；而由神经-内分泌-高代谢反应所引起术后营养障碍则是其发展的必须条件，两则有相互促进的关系。 2.予以术后营养支持，能缓解、遏制POFS的发生发展；人参是传统补益中药，对中枢神经系统、免疫系统等都有广泛作用，促进疲劳恢复、提高应激能力均有一定作用。以人参皂甙Rbl强化EN，可以有对大鼠POFS模型有治疗作用，促进快速康复。其改善其术后疲劳情况，与剂量有关；EN+Rbl其可能主要机制为强化术后营养、遏制高代谢、增加免疫力、抑制氧自由基反应对细胞及酶活性的损害。

目录

文摘

英文文摘

声明

引言

第一部分 大鼠POFS建模

材料及方法

结果

第二部分 人参皂Rb1强化EN对POFS模型的影响

材料和方法

结果

分析与讨论

结论

参考文献

附录

致谢

综述 肠内营养对术后疲劳综合征的研究的进展