脂氧素A对M-CSF促进重度子痫前期患者单核细胞分泌TNF-α和IL-1β的影响及其机制研究

摘要

目的：
　　 探讨脂氧素A4(lipoxiA4,LXA4)对巨噬细胞集落刺激因子(macrophagecolony-stimulating factor,M-CSF)促进重度子痫前期(severe preeclampsia,SPE)患者外周血单核细胞分泌TNF-α和IL-1β的影响及其可能机制。
　　 方法：
　　 收集温州医学院附属第一医院产科2008年10月至2009年5月收治的15例SPE患者(SPE组)和20例正常孕妇(正常妊娠组)的外周静脉血,用Ficoll密度梯度离心法分离外周血单核细胞进行体外培养。测定O ng/ml M-CSF和100ng/ml M-CSF刺激下两组单核细胞分泌TNF-α和IL-1β的水平。将不同浓度LXA4(0、10、100 nmol/L)加入100ng/ml M-CSF刺激下的两组单核细胞进行体外培养24小时。采用酶联免疫吸附实验测定上清液中TNF-α和IL-1β的浓度。钙离子荧光探针Fluo-3 AM负载单核细胞后,用激光共聚焦扫描显微镜动态检测单核细胞胞浆内游离钙离子浓度([Ca2+]i)的变化。
　　 结果：
　　 1.在0 ng/ml M-CSF刺激时,SPE组TNF-α水平为(170.91±42.97)pg/L,高于正常妊娠组[(103.33±22.62)pg/L](P<0.05)；SPE组IL-1β水平为(30.30±6.80)pg/L,高于正常妊娠组[(15.55±5.47)pg/L](P<0.05)。在100 ng/ml M-CSF刺激时,SPE组TNF-α水平为(435.16±55.08)Pg/L,高于正常妊娠组[(132.29±35.65)pg/L](P<0.05):SPE组IL-1β水平为(63.16±8.20)pg/L,高于正常妊娠组[(19.22±7.43)pg/L](P<0.05)。两组TNF-α和IL-1β水平在100ng/ml M-CSF刺激时较O ng/ml M-CSF刺激时明显升高(P<0.05)。
　　 2.不同浓度LXA4(0 nmol/L、10 nmol/L、100 nmol/L)作用下,SPE组培养上清液中TNF-α水平分别为(435.16±55.08)pg/L、(357.43±41.22)pg/L、(317.08±45.60)pg/L；正常妊娠组培养上清液中TNF-α水平分别为(132.29±35.65)pg/L、(119.24±26.22)pg/L、(117.03±35.35)pg/L。不同浓度LXA4作用下SPE组培养上清液中TNF-α水平明显降低,且呈浓度依赖性(P<0.05),其对正常妊娠组TNF-α水平无明显影响(P>0.05)。
　　 3.不同浓度LXA4(O nmol/L、10 nmol/L、100 nmol/L)作用下,SPE组培养上清液中IL-1β水平分别为(63.16±8.20)pg/L、(52.37±8.08)pg/L、(43.16±6.89)pg/L:正常妊娠组培养上清液中IL-1β水平分别为(19.22±7.43)pg/L、(16.99±6.32)pg/L、(15.18±5.24)pg/L。不同浓度LXA4作用下SPE组培养上清液中IL-1β水平明显降低,且呈浓度依赖性(P<0.05),其对正常妊娠组IL-1β水平无明显影响(P>0.05)。
　　 4.在SPE组中100 nmol/L LXA4对100 ng/ml M-CSF刺激下单核细胞分泌TNF-α和IL-1β的抑制率分别为(27.19±3.84)％、(31.67±6.07)％,明显高于对0ng/ml M-CSF刺激下的抑制率[(16.91±6.15)％、(24.89±9.22)％](P<0.05):在正常妊娠组中100 nmol/L LKA4对100 ng/ml M-CSF刺激下单核细胞分泌TNF-α和IL-1β的抑制率分别为(12.08±5.85)％、(10.82±2.42)％,与对0 ng/ml M-CSF刺激下的抑制率无明显差别[(10.71±3.19)％、(9.06±5.27)％](P>0.05)。
　　 5.激光共聚焦扫描显微镜检测结果显示SPE组单核细胞胞浆内[Ca2+]i较正常妊娠组升高(P<0.05)。在含钙外液中100nmol/L LXA4可降低SPE组单核细胞内[Ca2+]i(P<0.05):在无钙外液中100nmol/L LXA4对SPE组[Ca2+]i无明显影响(JP>0.05)。
　　 结论：
　　 M-CSF能促进重度子痫前期患者单核细胞分泌TNF-α和IL-1β。LXA4则能有效抑制M-CSF上调重度子痫前期患者单核细胞分泌TNF-α和IL-1β,其机制可能是通过抑制细胞外钙内流而使胞浆内[Ca2+]i降低。