甲磺酸卡莫他特对脑出血后脑水肿形成抑制作用的研究

摘要

目的：1.研究补体的蛋白溶解片段在脑出血（intracerebral hemorrhage，ICH）后脑水肿形成中的作用；2.研究甲磺酸卡莫他特（Camostat Mesilate，CM）对补体激活过程中形成的蛋白溶解片段的影响；3.观察CM对ICH后脑水肿形成的抑制作用；4.探讨CM对ICH后脑水肿形成抑制作用的机制。 方法：1.分组：将90只SD雄性大鼠随机分成假手术组、ICH对照组及CM治疗组，每组30只，每组分成6个观察时点，分别为术后12h、1d、2d、3d、7d、14d，每个时点5只大鼠。2.造模及给药：采用立体定向仪把自体血注入大鼠右侧尾状核制作大鼠ICH动物模型，术后两小时进行模型成功评价，治疗组于造模成功后胃内注入CM50mg/kg—d； ICH对照组于造模成功后每天胃内注入等体积生理盐水；假手术组的手术操作程序与ICH组相同，但尾状核不注入自体血，针留置约10分钟。3.术后各时点进行神经功能障碍评分。4.干湿法观察不同时点血肿周围脑组织含水量。5.放射免疫法测定不同时点血肿周围脑组织IL—1β、IL—6、TNF—α含量。6.比色法测定不同时点血肿周围脑组织非血红素铁含量。7.免疫组化法分析不同时点血肿周围脑组织补体片段C5a、C9表达情况。 结果：1.假手术组、ICH对照组及CM治疗组术后各时点神经功能障碍评分变化：ICH对照组在术后12h～14d的神经功能障碍评分显著低于各相应时点的假手术组（P<0.05）；在ICH对照组各时点，以术后2d的神经功能障碍评分最低，与术后3d相比无统计学意义（P>0.05），与该组其他时点差异有显著性（P<0.05）； CM治疗组在术后12h～7d的神经功能障碍评分显著低于各相应时点的假手术组（P<0.05）； CM治疗组在术后2d～7d的神经功能障碍评分显著高于各相应时点的ICH对照组（P<0.05）。2.假手术组、ICH对照组及CM治疗组术后各时点血肿周围脑组织含水量变化：ICH对照组在术后1d～7d的脑组织含水量显著高于各相应时点的假手术组（P<0.05）；在ICH对照组各时点，以术后2d的脑组织含水量最高，与术后3d相比无统计学意义（P>0.05），与该组其它时点相比差异有显著性（P<0.05）； CM治疗组在术后1d～3d的脑组织含水量显著高于各相应时点的假手术组（P<0.05）； CM治疗组在术后1d～7d的脑组织含水量显著低于各相应时点的ICH对照组（P<0.05）。3.假手术组、ICH对照组及CM治疗组术后各时点血肿周围脑组织IL—1β含量的变化：ICH对照组在术后12h～3d的IL—1β含量显著高于各相应时点的假手术组（P<0.05）；在ICH对照组各时点，以术后2d IL—1β含量最高，与该组其它时点相比差异有显著性（P<0.05）； CM治疗组在术后12h～3d的IL—1β含量显著高于各相应时点的假手术组（P<0.05）； CM治疗组在术后2d～3d的IL—1β含量显著低于各相应时点的ICH对照组（P<0.05）。4.假手术组、ICH对照组及CM治疗组术后各时点血肿周围脑组织IL—6含量的变化：ICH对照组在术后1d～7d的IL—6含量显著高于各相应时点的假手术组（P<0.05）；在ICH对照组各时点，以术后2d IL—6含量最高，与该组其它时点相比差异有显著性（P<0.05）； CM治疗组在术后1d～3d的IL—6含量显著高于各相应时点的假手术组（P<0.05）； CM治疗组在术后2d～3d的IL—6含量显著低于各相应时点的ICH对照组（P<0.05）。5.假手术组、ICH对照组及CM治疗组术后各时点TNF—α含量的变化：ICH对照组在术后12h～3d的TNF—α含量显著高于各相应时点的假手术组（P<0.05）；在ICH对照组各时点，以术后2d TNF—α含量最高，与术后12h、1d、3d时相比无统计学意义（P>0.05），与术后7d、14d相比差异有显著性（P<0.05）； CM治疗组在术后1d～2d的TNF—α含量显著高于各相应时点的假手术组（P<0.05）； CM治疗组在术后1d～2d的TNF—α含量显著低于各相应时点的ICH对照组（P<0.05）。6.假手术组、ICH对照组及CM治疗组术后各时点血肿周围脑组织非血红素铁含量的变化：ICH对照组在术后2d～14d的非血红素铁含量显著高于各相应时点的假手术组（P<0.05）；在ICH对照组各时点，以术后14d非血红素铁含量最高，与该组其它时点相比差异有显著性（P<0.05）； CM治疗组在术后2d～14d的非血红素铁含量显著高于各相应时点的假手术组（P<0.05）； CM治疗组在术后2d～14d的非血红素铁含量显著低于各相应时点的ICH对照组（P<0.05）。7.假手术组、ICH对照组及CM治疗组术后各时点血肿周围脑组织补体C5a表达的变化：ICH对照组在术后12h～14d的补体C5a表达阳性细胞数显著高于各相应时点的假手术组（P<0.05）；在ICH对照组各时点，以术后2d补体C5a表达阳性细胞数最多，与该组其它时点相比差异有显著性（P<0.05）； CM治疗组在术后12h～14d的补体C5a表达阳性细胞数显著高于各相应时点的假手术组（P<0.05）； CM治疗组在术后12h～7d的补体C5a表达阳性细胞数显著低于各相应时点的ICH对照组（P<0.05）。8.假手术组、ICH对照组及CM治疗组术后各时点血肿周围脑组织补体C9表达的变化：假手术组各时点均未见补体C9表达；在ICH对照组各时点，以术后1d补体C9表达阳性细胞数最多，与该组其它时点相比差异有显著性（P<0.05）； CM治疗组在12h～7d的补体C9表达阳性细胞数显著低于各相应时点的ICH对照组（P<0.05）。9.直线相关分析：（1）ICH对照组：神经功能障碍评分与脑组织含水量、IL—1β含量、IL—6含量、TNF—α含量、补体C5a表达阳性细胞数、补体C9表达阳性细胞数均呈负相关；脑组织含水量与IL—1β含量、IL—6含量、TNF—α含量、补体C5a表达阳性细胞数、补体C9表达阳性细胞数均呈正相关；补体C5a表达阳性细胞数与IL—1β含量、IL—6含量、TNF—α含量均呈正相关；补体C9表达阳性细胞数与IL—1β含量、IL—6含量、TNF—α含量均呈正相关。（2）CM治疗组：神经功能障碍评分与脑组织含水量、IL—1β含量、IL—6含量、TNF—α含量、补体C5a表达阳性细胞数、补体C9表达阳性细胞数均呈负相关；脑组织含水量与IL—1β含量、IL—6含量、TNF—α含量、补体C5a表达阳性细胞数、补体C9表达阳性细胞数均呈正相关；补体C5a表达阳性细胞数与IL—1β含量、IL—6含量、TNF—α含量均呈正相关；补体C9表达阳性细胞数与IL—1β含量、IL—6含量、TNF—α含量均呈正相关。 结论：自体血制作SD大鼠ICH动物模型，制作方法简单，易于操作，重复性好，与人ICH病理生理变化基本一致，可作广泛使用。在ICH后，血肿周围脑组织补体级联反应产生的补体溶解片段加重炎症反应，生成的膜攻击复合物（membrane attack complex，MAC）破坏红细胞，红细胞的代谢产物参与了ICH后脑水肿的形成。在ICH后，应用CM能改善其神经功能，减轻其脑水肿。CM可通过抑制蛋白酶而阻碍补体级联反应，从而减轻炎症反应和减少红细胞的破坏来发挥对ICH后脑水肿形成的治疗作用。

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综述：补体与脑出血后继发脑损害的关系

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