基因芯片筛选胃癌5-FU耐药基因标志谱及其耐药细胞株的建立

摘要

目的：利用化疗药物对胃癌细胞株BGC-823反复筛选、诱导，建立具有耐药性的胃癌细胞株，并与亲代细胞株BGC-823对比生长特性及基因谱表达改变。初步探讨胃癌的耐药机制，为胃癌临床化疗方法改进提供理论依据。 方法： 1、体外培养胃癌细胞株BGC-823。利用MTT法进行舌癌细胞株的梯度急性毒性试验，了解各种化疗药物不同浓度对胃癌细胞株BGC-823的杀伤效应，估计化疗药物的长期效应，为耐药细胞株的诱导、筛选寻找合适的初始剂量和药物浓度提升梯度。 2、利用5-氟脲嘧啶(5-flurou-racil，5-Fu)大剂量浓度逐渐递增间歇给药的方法杀死绝大部分敏感的BGC-823细胞后，撤除化疗药物，让剩余的细胞在无药培养基中继续培养，使其逐渐恢复生长达到可以常规传代的水平。再次加入化疗药物，重复以上过程，通过反复诱导、筛选，得到胃癌耐药细胞株，分别命名为BGC-823/Fu。 3、对比亲代细胞株Tca8113及其耐药细胞株Tca8113/Ca和Tca8113/Fu之间的形态改变。 4、分别抽提亲代细胞株和两个耐药细胞株(Tca8113，Tcas113/Ca和Tca8113/Fu)的总RNA，进行基因芯片分析对比它们基因表达谱的改变。 结果： 1、通过间歇加药的方法建立了胃癌细胞株5-氟脲嘧啶耐药细胞株，命名为BGC-823/Fu； 2、用耐药细胞株BGC-823/Fu的基因表达谱对比亲代细胞株BGC-823基因表达谱，有97条基因表达出现差异，其中64条基因发生上调，33条发生下调。 结论： 1、成功建立了胃癌耐药细胞株BGC-823/Fu 2、通过基因芯片表达谱分析，5-FU诱导胃癌耐药细胞产生获得性耐药可能涉及影响不同生化途径的多群遗传因子表达的改变，用基因芯片获得化疗药物在肿瘤细胞的分子标志谱是可行的，基因微阵列有望成为一种能够预测个体患者对某种化疗药物是否耐药的方法，为肿瘤的个体化化疗开辟新的途径。

目录

声明

第一部分 胃癌5－氟尿嘧啶耐药细胞株的建立及其生物学特性

1.材料与方法

2.实验方法

3.灾光定量RT-PCR实验步骤：

4.统计学处理

5.结果：

6.讨论

7.结论

第二部分 基因芯片对胃癌耐药细胞株基因的表达谱分析

1.材料与方法

2.结果

3.讨论

4.结论

5.参考文献

文献综述 基因芯片在指导肿瘤化疗中的研究进展

攻读学位期间发表文章及科研情况

个人简历

致谢