真性红细胞增多症的细胞遗传学及其骨髓间充质干细胞功能特性的研究

摘要

第一部分真性红细胞增多症的细胞遗传学研究 目的：研究真性红细胞增多症(PV)的细胞遗传学特点，并探讨间期荧光原位杂交(FISH)技术在检测PV中8三体(+8)及9三体(+9)的价值。 方法:采用常规细胞遗传学(CC)技术检测50例初诊PV患者的细胞遗传学特征，间期FISH技术检测PV患者中的+8和+9，并与CC检测结果进行比较。以8名正常人骨髓细胞作为对照。 结果: 50例初诊PV中CC检出3例核型异常，一例为+8，1例为-Y，1例为inv(11)(p15；q22)，+?，der(19)。染色体异常发生率为6％。FISH检测2例为+8，1例与CC检测结果一致。CC未检出+9，FISH检出1例+9。 结论: PV中染色体异常发生率偏低，其中+8和+9发生率略低于国外报道，可能与样本的选择及数量大小有关；间期FISH技术对检测三体有重要价直，是CC的重要补充。 第二部分真性红细胞增多症骨髓问充质干细胞的分离培养及其功能特性的研究 目的：分离、培养真性红细胞增多症(PV)患者骨髓间充质干细胞(MSCs)，并对MSCs的功能、特性进行研究。 方法:采集9例初诊PV患者和6例正常个体的骨髓，应用密度梯度离心法结合贴壁培养法获取MSCs，常规胰酶消化传代，逐级扩增。分别取第3、6、10代培养细胞，Giemsa染色观察细胞形态，隔天消化细胞计数绘制细胞生长曲线，电镜检测MSCs的超微结构，流式细胞术检测MSCs免疫表型和细胞周期，通过油红O染色、Von Kossa染色检测MSCs向脂肪、骨的分化，常规核型分析检测MSCs染色体，等位基因特异性．聚合酶链反应(AS-PCR)检测其JAK2V617F点突变。 结果: PV和正常个体来源的MSCs均呈成纤维样贴壁生长，细胞倍增时间约为43h，流式细胞术检测大部分细胞处于静止期(>90％)，只有少部分细胞处于分裂期(<10％)。MSCs表达CD73、CD90，而CD34、CD45、CD133、肌A-DR均为阴性。MSCs在相应的诱导条件下可以向骨、脂肪分化。PV和正常个体来源的MSCs染色体检测均为正常核型，其JAK2V617F点突变均为阴性。 结论: PV患者骨髓中存在具有多向分化能力的MSCs，该细胞群体表现为正常MSCs的生物学特性。

目录

声明

前言

第一部分真性红细胞增多症的细胞遗传学研究

一、材料与方法

二、结果

三、讨论

四、小结

参考文献

第二部分真性红细胞增多症骨髓间充质干细胞的分离培养及其功能特性的研究

一、材料与方法

二、结果

3.讨论

四、小结

参考文献

附图

附录

致谢