中国荷斯坦奶牛乳铁蛋白基因多态性与乳腺炎相关性的研究

摘要

本研究选取中国荷斯坦奶牛群体共计250头个体为研究对象，采用PCR-RFLP技术对试验牛群中存在的乳铁蛋白基因的四个多态位点进行了PCR扩增、酶切检测和测序分析，发现该牛群的乳铁蛋白基因四个多态位点均存在三种基因型；结合试验牛群的DHI测定所得到的育种资料记录和生产性能指标（主要选择体细胞评分、产奶量、乳脂率和乳蛋白率），运用最小二乘线性模型，对这几个位点的多态性与奶牛乳腺炎之间的相关性进行了分析，发现乳铁蛋白基因-916位点的T/G突变和-927位点的G/A突变所产生的不同基因型与生产性状之间的效应检验不显著，而+72位点的T/C突变和-478位点的G的插入所产生的不同基因型之间的生产性能指标出现差异，并找到了具有乳腺炎抗性的基因型和优良的等位基因，为进一步的标记辅助选择提供了有力的依据，并为奶牛乳腺炎的抗病育种工作提供了理论依据。研究结果如下： 根据NCBI上已登录的乳铁蛋白基因序列并参考Seyfert所报道的多态位点，确定所研究的四个突变位点并对乳铁蛋白基因进行了PCR扩增和测序分析。研究发现：本试验奶牛群体在这四个位点上均存在突变，分别是-927位点的G到A的突变，-916位点的T到G的突变，-478位点的G的插入和+72位点的T到C的突变，预期结果与报道的一致。 利用改造的酶切位点对-927位点、-916位点和+72位点的PCR扩增产物分别进行TaqⅠ、HaeⅢ和Eco T14Ⅰ酶切，利用已存在的酶切位点对-478位点进行HpyF10VⅠ酶切，通过聚丙烯酰胺凝胶电泳对酶切产物检测分析，发现在这四个突变位点上均存在有三种基因型：AA基因型、AB基因型和BB基因型。 结合DHI测定所记录的该试验奶牛群的生产性能数据，利用统计分析软件SAS将乳铁蛋白基因四个位点上的突变所产生不同基因型对体细胞评分、产奶量、乳脂率和乳蛋白率的效应进行最小二乘均值显著性检验。结果发现：+72位点（T/C）的AB基因型个体的SCS值极显著低于BB基因型个体（P<0.01），显著低于AA基因型个体（P<0.05），BB基因型个体与AA基因型个体差异不显著（P>0.05）；同时，AB基因型个体的产奶量值显著高于AA基因型、BB基因型个体（P<0.05），表明本试验奶牛群中AB基因型个体表现出乳腺炎抗性；-478位点（/G） AA基因型个体的SCS值极显著低于AB基因型、BB基因型个体（P<0.01），同时AA基因型个体的产奶量值显著高于AB基因型、BB基因型个体，表明本试验奶牛群中AA基因型个体表现出了乳腺炎抗性；另外，-478位点（/G） AB基因型个体的乳蛋白率、乳脂率显著高于AA基因型、BB基因型个体。因此，A等位基因是优良的等位基因。-916位点（T/G）和-927位点（G/A）的基因型对体细胞评分、产奶量、乳脂率、乳蛋白率的效应检验不显著。

目录

文摘

英文文摘

声明

引言

第一章奶牛乳腺炎研究进展

1.1奶牛乳腺炎概述

1.2奶牛乳腺炎的病因及危害

1.2.1病原微生物感染

1.2.2环境因素和管理因素

1.2.3其它因素

1.3奶牛乳腺炎的检测方法

1.3.1亚临床型(隐性)乳腺炎的主要诊断方法

1.4奶牛乳腺炎的遗传学研究

1.5奶牛乳腺炎的候选基因研究

第二章乳铁蛋白基因研究进展

2.1乳铁蛋白的结构及理化性质

2.2乳铁蛋白的生物学功能

2.2.1抑菌作用

2.2.2抗病毒作用

2.2.3免疫调控作用

2.2.4促进铁吸收作用

2.2.5抑癌作用

2.3乳铁蛋白基因多态性的研究

第三章材料与方法

3.1试验材料

3.1.1试验牛群的选择

3.1.2血样的采集

3.1.3主要试剂及来源

3.1.4主要试验仪器及来源

3.2试验方法

3.2.1乳铁蛋白基因PCR-RFLP分析

3.2.2统计方法及试验相关软件

第四章结果与分析

4.1乳铁蛋白基因PCR扩增结果

4.1.1 -927位点的PCR扩增结果

4.1.2 -916位点的PCR扩增结果

4.1.3 -478位点的PCR扩增结果

4.1.4 +72位点的PCR扩增结果

4.1.5测序引物P9P10的PCR扩增结果

4.1.6测序引物P11P12的PCR扩增结果

4.1.7测序引物P13P14的PCR扩增结果

4.2乳铁蛋白基因PCR扩增产物酶切结果

4.2.1 -927位点的酶切结果

4.2.2 -916位点的酶切结果

4.2.3 -478位点的酶切结果

4.2.4 +72位点的酶切结果

4.3乳铁蛋白基因四个位点的测序结果

4.3.1 -927位点和-916位点的测序结果

4.3.2 -478位点的测序结果

4.3.3 +72位点的测序结果

4.4乳铁蛋白基因多态性与群体的生产性状的相关性分析结果

第五章讨论

5.1奶牛乳腺炎的诊断与SCS

5.2乳铁蛋白基因5调控区潜在调节因子结合位点突变的影响

5.3乳铁蛋白基因的SNPs与乳腺炎的相关性

第六章结论

参考文献

附录 英文缩略表

致谢

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