雪莲果中糖类成分分离纯化及生物活性研究

摘要

雪莲果为菊科向日葵属双子叶草本植物，原产于南美安第斯山区。雪莲果植株富含多糖类、黄酮类、酚酸类和挥发油类等多种活性成分，具有食用、药用综合开发利用的价值。
　　本文以雪莲果块茎为原料，通过水提醇沉法提取得到雪莲果粗多糖和低聚糖粗品。对雪莲果粗多糖进行提取工艺优化，通过四因素三水平正交试验确定雪莲果粗多糖的最佳提取条件为:提取温度90℃，乙醇终浓度为80％(v/v)，料液比1∶15(g/mL)，提取时间2h。然后采用Sevage法除蛋白、大孔吸附树脂ADS-21脱色、DEAE-SephadexA-25和SephadexG-100柱层析分级纯化后，得到纯多糖YPS-Ia，苯酚-硫酸法测定其多糖含量为93.6％。紫外光谱全波长扫描测定结果表明，YPS-Ia中不含核酸和蛋白质。高效液相色谱法测定YPS-Ia的分子量为9.26×103Da，且纯度较高。采用化学方法初步研究了YPS-Ia的结构。用红外光谱分析初步判断YPS-Ia含有糖类特征官能团，为糖类化合物。气相色谱分析结果表明YPS-Ia含有4种单糖成分，其组成为阿拉伯糖、木糖、甘露糖和葡萄糖，摩尔比为12.8∶11.8∶52.5∶21.7。
　　采用薄层色谱法和高效液相色谱法对雪莲果低聚糖粗品进行定性定量分析，雪莲果低聚糖粗品的成分为果糖、葡萄糖、蔗糖、蔗果三糖、蔗果四糖，其含量分别为38.30％、16.44％、14.58％、12.29％、12.17％。用硅胶柱层析法从雪莲果低聚糖粗品中分离制备出蔗果三糖和蔗果四糖，其纯度分别82.9％、73.6％。
　　采用预防性高血脂动物模型实验方法考察雪莲果糖类成分的降血脂活性。结果发现:雪莲果糖类成分对小鼠体重增长无显著性影响;雪莲果粗多糖、YPS-Ia和低聚糖粗品极显著降低高血脂小鼠血清TC、TG和LDL-C含量(p＜0.01);YPS-Ia显著提高小鼠血清中HDL-C含量(p＜0.05)，并且YPS-Ia能极显著降低小鼠肝脏TG和TC含量(p＜0.01)。表明雪莲果中糖类成分对高脂饮食所致小鼠血脂升高有明显抑制作用，且YPS-Ia的效果优于粗多糖和低聚糖粗品，能有效预防高血脂症。

目录

声明

摘要

1 前言

1．1 雪莲果的研究进展

1．1．1 雪莲果概况

1．1．2 雪莲果的化学成分

1．1．3 雪莲果的生物活性

1．2 多糖的研究进展

1．2．1 多糖的提取方法

1．2．2 多糖的纯化

1．2．3 多糖的化学结构

1．2．4 多糖的生物活性

1．3 低聚糖的研究进展

1．3．1 低聚糖的概述

1．3．2 低聚糖的检测

1．3．3 低聚糖的分离

1．3．4 低聚糖的生物活性

1．4 本课题研究的目的、意义和主要内容

2 材料与方法

2．1 仪器、试剂与材料

2．1．1 仪器

2．1．2 试剂与材料

2．2 方法

2．2．1 雪莲果粗多糖的提取工艺优化

2．2．2 雪莲果多糖的分离纯化

2．2．3 雪莲果多糖的纯度鉴定及分子量测定

2．2．4 雪莲果多糖的结构分析

2．2．5 雪莲果低聚糖粗品的成分分析

2．2．6 蔗果三糖、蔗果四糖的制备

2．2．7 雪莲果中糖类降血脂活性研究

3 结果与讨论

3．1 雪莲果粗多糖的提取工艺优化

3．1．1 标准曲线的绘制

3．1．2 单因素试验结果分析

3．1．3 正交试验结果

3．2 雪莲果多糖的分离纯化

3．2．1 雪莲果蛋白质含量的测定结果

3．2．2 DEAE-Sephadex A-25柱层析

3．2．3 Sephadex G-100柱层析

3．3 雪莲果多糖的纯度鉴定

3．3．1 紫外吸收光谱分析

3．3．2 纯度鉴定和分子量测定

3．4 雪莲果多糖的结构分析

3．4．1 红外光谱分析

3．4．2 单糖组分结果分析

3．5 雪莲果低聚糖的成分分析

3．5．1 薄层色谱结果

3．5．2 高效液相色谱分析

3．5．3 蔗果三糖和蔗果四糖的制备

3．6 雪莲果中糖类的降血脂活性研究

3．6．1 雪莲果中糖类对小鼠体重的影响

3．6．2 雪莲果中糖类成分对小鼠血清血脂水平的影响

3．6．3 雪莲果中糖类成分对小鼠肝脏组织TC和TG的影响

3．6．4 肝脏组织病理学变化

4 结论

5 展望

参考文献

7 攻读硕士期间发表的论文

致谢