新疆加工番茄病毒种类鉴定和分离物XJB087的株系鉴定

摘要

2005-2006年间对新疆奎屯、石河子、玛纳斯、昌吉、焉耆和博湖等加工番茄主产区进行了加工番茄病毒病的广泛调查。调查发现新疆加工番茄病毒病害各地发病率达73～91％，平均发病率为82.1％，在田间主要表现为花叶、条斑坏死、蕨叶畸形、曲叶和矮化等多种类型的症状，以花叶和坏死条斑为主，其中花叶78％，条斑37％，并且条斑症状90％以上都伴有花叶症状。在采集的221个样品中，通过RT-PCR扩增感病植株的总RNA方法来鉴定病毒的种类，鉴定结果以TMV为优势病毒种类，占86.4％；CMV次之，占28.1％，PVY也有发生，为3.2％，TMV和CMV复合浸染17.6％。另外，调查显示新疆加工番茄病毒病的发生率与栽培措施有一定的关系。 从新疆博湖县花叶症状的加工番茄病株中，获得了病毒分离物XJB087，经过症状观察和RT-PCR扩增，证实病毒分离物XJB087是马铃薯Y病毒的一个株系。对病毒分离物XJB087的外壳蛋白基因进行了克隆和序列分析，以提取的。RNA为模板，应用RT-PCR扩增，PCR产物克隆到质粒PMD20-T上并序列分析。结果表明，克隆基因的片段由801个核苷酸组成，编码267个氨基酸。与基因库中PVY代表株系相比，结果核苷酸序列与PVYN，PVYO，PVYMN，PVYNTN，的同源率分别为97.1％、98.1％、89.8％、89.9％；氨基酸序列与PVYO，PVYN，PVYMN，PVYNTN的同源率分别为97.3％、98.9％、92.5％、92.1％。通过进化树分析表明XJB087与PVYN株系亲缘关系最近，确定XJB087归于马铃薯Y病毒坏死株系(PVYN株系)。根据GENEBANK中的PVY辅助蛋白基因(HC-Pro)序列设计引物，对病毒分离物XJB087进行了RT-PCR扩增，结果扩增出与预期目标大小相同的片段。通过克隆测序，与基因库中不同代表PVY株系的HC-Pro进行比较，经过进化树分析，与PVYN同源性最高，其中核苷酸同源性为94％，氨基酸同源性92％，进一步证明了PVY加工番茄分离物为PVYN株系。

目录

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论文说明：主要符号表

声明

第一章文献综述

1.1番茄主要病毒病发生概况

1.2马铃薯Y病毒研究概况

1.2.1 PVY的基因组结构及功能

1.2.2 PVY株系划分的研究

1.2.3 PVY病毒的侵染和传播

1.3加工番茄病毒病害的病毒主要检测方法

1.3.1生物学检测法

1.3.2电子显微镜检测技术

1.3.3血清学方法

1.3.4 dsRNA技术

1.3.5基本分子生物学方法

第二章材料与方法

2.1材料

2.1.1毒原

2.1.2质粒和载体

2.1.3酶及试剂

2.1.4主要仪器

2.1.5引物

2.2方法

2.2.1毒源的采集

2.2.2毒源的分离

2.2.3病毒分离物XJB087的生物学鉴定

2.2.4病毒分离物XJB087的侵染性试验

2.2.5病毒分离物XJB087的分子鉴定

第三章结果与分析

3.1新疆加工番茄病毒病害的发生与危害

3.1.1症状类型及发病率

3.1.2加工番茄播期与病毒病发生

3.1.3加工番茄重茬连作与病毒病的发生

3.1.4加工番茄病毒种类的鉴定

3.2病毒分离物XJB087的鉴定及其序列分析

3.2.1病毒分离物XJB087在几种寄主上的反应症状

3.2.2侵染性试验

3.2.3病毒分离物XJB087的RT-PCR鉴定

3.2.4病毒分离物XJB087 CP基因的克隆及鉴定

3.2.5病毒分离物XJB087 CP基因的序列测定和分析

3.3 XJB087分离物HC-PRO基因的扩增、克隆和序列分析

3.3.1 XJB087分离物HC-PRO基因的RT-PCR扩增

3.3.2 XJB087分离物HC-PRO基因克隆

3.3.3 XJB087分离物HC-PRO基因序列分析

第四章结论与讨论

参考文献

附录

致 谢

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