猪牙乳头细胞再生类牙本质的实验研究

摘要

目的：建立猪牙乳头来源间充质细胞的体外培养方法及体内再生类牙本质样组织的研究模型，为将来完整牙齿再生研究提供实验基础。 材料和方法：研究新生猪和3月龄猪的牙齿发育情况，获取钟状期牙乳头组织，机械分散联合酶消化法分离细胞，体外培养、扩增猪牙乳头细胞；研究其体外培养的生物学特征、细胞表型及形成矿化组织和牙本质的潜能；将原代或第1代牙乳头细胞复合β—TCP支架在裸鼠皮下回植8、16、25周，探讨再生类牙本质样组织的可行性。 结果： 1．新生猪的第一、第二磨牙及第二前磨牙牙胚和3月龄幼猪的第三磨牙胚处于钟状期，牙乳头的前期牙本质和成牙本质细胞局部表达DSP、ColI、Co1Ⅲ及BSP。 2．通过机械分散联合酶消化法成功培养了牙乳头细胞，细胞具有以梭形为主的形态多样性，其生长、增殖规律及细胞生长周期均与骨髓基质细胞相似，细胞群体倍增时间为 37.2小时。 3．细胞表型免疫组化鉴定：第1至6代牙乳头细胞DSP、 Cbfa1、Co1I染色阳性，第1代细胞ColⅢ染色阳性。 4．牙乳头细胞碱性磷酸酶染色阳性，矿化诱导后未形成典型钙结节，第1、2、6代细胞钙化相关蛋白ON、OPN染色弱阳性，OCN染色阴性。 5．体内回植物孔隙内形成了类牙本质样组织，HE染色及Go1dner’三色法特殊染色显示具有牙本质、前期牙本质、成牙本质细胞样细胞及牙髓样疏松结缔组织的结构特征，有少量排列紊乱的牙本质小管样结构，前期牙本质及成牙本质细胞样细胞局部DSP免疫组化染色阳性，牙髓样的疏松结缔组织、成牙本质细胞样细胞及前期牙本质Co1I、ColⅢ免疫组化染色阳性，透射电镜下可见有少量牙本质小管。 结论：本课题以培养牙乳头细胞为主线展开研究，明确了新生猪及3月龄猪的中处于钟状期牙胚的牙位，确定了取材方法，成功建立了牙乳头细胞体外培养模型，培养的细胞具有与骨髓基质细胞相似的生物学特征、形成矿化组织潜能及成牙本质细胞的分化表型，原代及第1代细胞复合支架材料后在裸鼠皮下形成了类牙本质样组织。为进一步深入进行牙齿再生研究奠定了实验基础。

目录

文摘

英文文摘

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前言及研究背景

第一部分猪牙乳头细胞的分离、培养及鉴定

第二部分猪牙乳头细胞的生物学特征及形成矿化组织潜能

第三部分猪牙乳头细胞再生类牙本质的体内实验

全文结论

参考文献

致谢

附录一英文缩略语表

附录二在读期间发表文章目录