轴索损伤标志物在多发性硬化中的临床意义

摘要

多发性硬化(MS)巳不再被简单地认为是一种自身免疫性脱髓鞘疾病，轴突损伤是另一重要的病理特征，而且也是疾病进展和神经功能障碍累积的促进因素。对MS中轴突损伤机制的研究可为理解和治疗该病提供了新的思路。在MS中引起轴索损伤的具体原因仍并不清楚，但直接针对轴索细胞骨架特定成分的破坏过程可能导致了神经功能缺损的累积。神经丝(NF)为神经元的骨架蛋白。也是呈现轴索损伤的重要生物标志物之一。本研究的目的是了解轴索损伤相关标志物检测在多发性硬化(MS)中的临床意义，并探讨其在多发性硬化发生和发展过程中的可能作用。 本研究由两部份内容组成。　　第一部份系通过匀浆、脱脂、酸提和电泳纯化从牛脊髓组织中制备了MBP；以MBP免疫新西兰大白兔获得抗MBP多克隆抗体。将已转化重组质粒PET32a-MOGIgd的BL21trxB-宿主菌诱导表达，并应用金属螯合亲和层析柱进行纯化，获取高纯度的MOGIgd-trxA融合蛋白及trxA担体蛋白。为建立相关生物标志物检测系统提供必备要素。 第二部份又包括轴索损伤标志物测定系统的构建和临床样本的测定和结果分析两个内容。 分别以NF-L、MBP的多克隆和单克隆抗体建立起NF-L和MBP的ELISA检测系统。同时又分别以NF-L、MBP和MOGIgd-trxA融合蛋白及trxA担体蛋白为包被抗原，建立起NF-L抗体、MBP抗体和MOG抗体的ELISA检测系统。实验数据表明所建立的诸检测系统均具有较好的重现性，可以用于临床样本分析。以所建立的ELISA检测系统对63例：MS、15例视神经脊髓炎(ONM)、31例其他炎性神经系统疾病(OIND)、18例非炎性神经系统疾病(NIND)和46例神经系统正常对照(NC)的血清和脑脊液样本进行了检测，观察比较MS与各对照组的NF-L及抗体的水平及其与M=BP、MBP抗体、MOG抗体的相关性。 测定结果显示，脑脊液(CSF)中各组的NF-L浓度均明显高于NC组，以目前的ELISA检测系统灵敏度未能检测出血清中的NF-L；脑脊液和血清中NF-L抗体的阳性率各组均高于NC组；NF-L抗体水平MS组低于OIND，高于NIND和NC组。MS组脑脊液和血清中MBP浓度和MBP抗体的阳性率均高于NC组。 其MOG抗体阳性率脑脊液中高于NC组，但在血清中与NC组间无显著差异。MS患者CSF中NF-L抗体水平与IgG水平和MBP抗体水平显著相关。当血脑屏障通透性发生改变时，脑脊液和血清中MBP浓度存在相关。轴索损伤现象普遍存在于多种神经系统疾病中，单一的生物标志物检测均无助于对该病作出特异性诊断和鉴别诊断。进一步扩大样本量，进行MS不同类型其脑脊液及外周血中NF-L抗原抗体的分析以及有可能将CSF中一组而非单个生物标志物用于MS临床诊断及病情发展监测，将是我们今后MS体液免疫研究的重要内容。

目录

论文说明:主要缩略语

声明

前言

第一部分MBP、MBP多克隆IgG的制备及鉴定和MOGIgd蛋白表达与纯化

材料与方法

结果

讨论

第二部分MS患者血清和脑脊液中NF-L和NF-L抗体、MBP和MBP抗体及MOG抗体的检测及临床意义

一、NF-L和NF-L抗体、MBP和MBP抗体及MOG抗体的ELISA检测系统的建立

材料和方法

结果

小结

二、MS患者脑脊液和血清中NF-L和NF-L抗体、MBP和MBP抗体及MOG抗体检测的临床意义

材料和方法

结果

小结

讨论

参考文献

多发性硬化与轴索损伤

全文结语

致谢