SURVIVIN和PTEN的表达与宫颈鳞癌淋巴结转移的关系及其临床意义的研究

摘要

宫颈癌是最常见的妇科恶性肿瘤，占女性生殖系统恶性肿瘤的首位，其中又以宫颈鳞状细胞癌(Squamous cell carcinoma,SCC)最为多见。我国是宫颈癌的高发地区，尤其在农村，其发生率及死亡率均居妇女恶性肿瘤的首位。宫颈癌的临床分期、肿瘤分级及淋巴结转移被公认为是影响宫颈癌预后的重要因素，正确评估宫颈癌生物学行为及其预后情况，对临床治疗及改善患者的生存质量具有极其重要的意义。 肿瘤的发生发展是一个多因素作用的复杂过程，癌基因的激活，抑癌基因的失活和细胞的凋亡等均参与了宫颈癌的发生发展过程。淋巴系统的转移亦是多基因异常共同作用的结果，通过细胞信号传导、生长周期调控、凋亡调节等网络来控制肿瘤细胞的增殖、分化及转移。近年来，宫颈鳞状细胞癌的淋巴结转移已被认为是重要的预后因素并引起广泛的重视。如何在术前检测是否发生淋巴结的转移有待于进一步的研究。 Survivin是近年发现的凋亡抑制蛋白，主要是抗凋亡和调节细胞有丝分裂，参与细胞增殖，调节肿瘤血管生成。它主要是通过抑制蛋白酶级联过程中位于下游的半胱天冬氨酸酶caspase-3和caspase-7的活性而发挥凋亡抑制作用。 PTEN是一个具有脂质磷酸酶活性和蛋白磷酸酶活性的肿瘤抑癌基因，主要是阻断细胞接受的外界生存增殖信号，诱导凋亡；抑制细胞增殖、迁移；抑制P13K/AKT信号传导，促进凋亡。 Survivin和PTEN是肿瘤细胞浸润与转移的重要调节因子，与胃癌、乳腺癌、膀胱癌、卵巢癌、子宫内膜癌等多种肿瘤的转移及预后密切相关。Survivin和PTEN的表达与宫颈癌的发生进展中的作用也逐步受到重视，但目前相关的研究较少，且研究结果不完全一致，有必要进一步探讨。本研究采用免疫组化方法，通过观测Survivin和PTEN在慢性宫颈炎组织、有/无淋巴结转移的宫颈鳞癌中的表达情况，来分析Survivin和PTEN在宫颈鳞癌淋巴结转移中的表达情况及临床意义。 目的： 研究Survivin和PTEN在慢性宫颈炎组织中，无腹膜后淋巴结转移和有腹膜后淋巴结转移的宫颈鳞癌中的表达，探讨其在宫颈鳞癌的淋巴转移中的作用。 材料与方法： 1.标本来源 取中山大学附属二院和深圳市宝安区人民医院2007年1月～2007年9月的宫颈鳞癌患者65例，慢性宫颈炎患者10例。患者年龄24-63岁，平均43.6±8.6岁。所有病例取标本前均未实行放疗和化疗，资料完整，且经病理确诊。其中伴有腹膜后淋巴结转移宫颈鳞癌患者35例，年龄24-63岁，平均43.5±7.5岁。无腹膜后淋巴结转移宫颈鳞癌患者30例，年龄30-61岁，平均42.2±9.1岁，两组相比较无统计学差异。宫颈鳞癌按国际妇产科联盟(FIGO，1996)临床分期，其中有淋巴结转移组包括Ⅰ期13例，Ⅱ期22例，无淋巴结转移组Ⅰ期24例，Ⅱ期6例，两组相比较有统计学差异。细胞分化程度，有淋巴结转移组G12例，G218例，G315例；无淋巴结转移组G11例，G216例，G313例。两组相比较无统计学差异。全部标本经10％福尔马林液固定，石蜡包埋。 2.实验分组 将所选病例分为3组：慢性宫颈炎组10例，无腹膜后淋巴结转移宫颈鳞癌组30例，有腹膜后淋巴结转移宫颈鳞癌组35例。 3.实验试剂 Survivin多克隆抗体、PTEN单克隆抗体、即用型SP试剂盒和DAB试剂盒均购自福州迈新生物技术有限公司。 4.免疫组化检测 采用S-P法染色，切片常规脱蜡水化后，加入过氧化酶阻断溶液阻断内源性过氧化物酶的活性，抗原修复后加入第一抗体，室温下孵育后再加入链霉素抗生物素蛋白-过氧化物酶溶液，DAB显色，苏木素复染、脱水、透明、封片。 5.试验对照 阴性对照组：用PBS代替一抗。阳性对照组：采用已知的子宫颈鳞癌组织切片。 6.结果判断 免疫组化染色结果按盲法由一位有经验的病理医生独立进行判断。光学显微镜下观察并摄片，见细胞中出现棕黄色颗粒的细胞为阳性信号。阳性信号采用Image-pro-plus5.0图像分析系统进行定量分析，Survivin和PTEN免疫反应产物的标记用光密度(A)表示，在镜下随机选取5个视野，每个视野系统自动随机测定3个不同的部位，提取阳性细胞，测定Survivin和PTEN的A值。 7.统计分析 数据采用SPSS12.0统计软件处理，实验数据符合正态分布者用均数±标准差表示，正态数据多组间比较采用单因素方差分析，两组间的比较采用最小显著差异法(LSD，Least significant Difference)检验，非正态数据两组间的比较采用Wilcoxon秩和检验，采用pearson进行相关分析，取p<0.05为标准。 结果： 1.Survivin和PTEN在慢性宫颈炎组织，宫颈鳞癌组织中的表达 Survivin在慢性宫颈炎组、无腹膜后淋巴结转移宫颈鳞癌组、有腹膜后淋巴结转移宫颈鳞癌组中的平均光密度值(A)分别为：0.121±0.145，0.217±0.018，0.308±0.051。Survivin的表达在有腹膜后淋巴结转移宫颈鳞癌组高于无腹膜后淋巴结转移宫颈鳞癌组和慢性宫颈炎组(p<0.05)，无腹膜后淋巴结转移宫颈鳞癌组高于慢性宫颈炎组(p<0.05)。 PTEN在慢性宫颈炎、无腹膜后淋巴结转移宫颈鳞癌组、有腹膜后淋巴结转移宫颈鳞癌组中的平均光密度值(A)分别为：0.300±0.024，0.215±0.034，0.126±0.022。PTEN的表达在慢性宫颈炎组高于宫颈鳞癌组(p<0.05)，无腹膜后淋巴结转移宫颈鳞癌组高于有腹膜后淋巴结转移宫颈鳞癌组的表达(p<0.05)。 2. Survivin和PTEN在有淋巴结转移的宫颈鳞癌组织表达的相关性 在宫颈鳞癌组织中，Survivin的表达上调，PTEN的表达下调，提示淋巴结转移的发生，二者在有腹膜后淋巴结转移宫颈鳞癌组中，Survivin与PTEN表达的相关系数R=-0.639，两者有负相关性。(P<0.05)。 结论： 1.宫颈鳞癌组织中Survivin表达上调，PTEN的表达下调。Survivin及PTEN的表达与宫颈鳞癌的淋巴转移行为密切相关，可作为宫颈鳞癌预后评估的参考指标。 2.在有淋巴结转移的宫颈鳞癌组织中，Survivin与PTEN的表达呈负相关性。

目录

文摘

英文文摘

声明

第一章前言

第二章研究目的

第三章材料与方法

第四章结果

第五章讨论

第六章结论

展望

参考文献

附图

附录

致谢