反应型荧光探针用于过氧化氢和葡萄糖的检测

摘要

荧光传感器具有高灵敏度、高选择性的优点，由于其价格低廉、操作简便，因而被广泛的用于生物、化学、医药等领域。本论文研究了一种基于反应型水溶性荧光探针荧光增强检测过氧化氢和葡萄糖的方法。
　　本实验以商品化的间氨基苯磺酸为单体，利用铁离子存在下，过氧化氢氧化其聚合形成水溶性共轭聚合物为指示探针，建立了高灵敏荧光增强检测食品、生物样品中的过氧化氢与葡萄糖的新方法。详细考察了不同种类单体以及金属离子对测定体系的影响。研究表明:以间氨基苯磺酸为单体、在三价铁离子存在下，体系荧光强随过氧化氢量的增加而增强，所以实验中选择间氨基苯磺酸和三价铁离子作为测定过氧化氢的反应体系。研究了单体浓度、金属离子浓度、各种缓冲溶液及pH值、反应时间影响;通过紫外可见光谱、1H NMR等手段，研究了该荧光探针的反应机理。在最优的实验条件下，过氧化氢的浓度在9×10-7mol/L-1×10-5mol/L和1×10-5mol/L-1×10-4mol/L范围内与荧光强度的变化呈现良好的线性关系，线性相关系数均在0.99以上，检测限低至5×10-7mol/L。并运用所建立的方法检测了牛百叶中过氧化氢的含量。
　　由于葡萄糖能被葡萄糖氧化酶氧化生成过氧化氢，因此在葡萄糖氧化酶存在下，当体系中存在葡萄糖时，就会有过氧化氢生成，从而使体系的荧光强度明显增加，据此可以使用同样的荧光探针测定葡萄糖的含量。我们对葡萄糖氧化酶的浓度和反应时间进行了优化。在最优的实验条件下，葡萄糖的浓度在1×10-7mol/L-5×10-6mol/L和1×10-5mol/L-5×10-5mol/L范围内与荧光强度的变化量呈现良好的线性关系，线性相关系数分别为0.99和0.98以上，检测限低至1×10-8mol/L。并且将该方法应用于人血清中葡萄糖的定量检测。

目录

声明

摘要

1 前言

1．1 活性氧简介

1．2 过氧化氢简介

1．2．1 过氧化氢的概述

1．2．2 过氧化氢的性质

1．2．3 过氧化氢的用途

1．2．4 过氧化氢的分析方法

1．3 葡萄糖简介

1．3．1 葡萄糖概述

1．3．2 葡萄糖的测定方法

1．4 荧光探针简介

1．4．1 荧光探针的组成

1．4．2 荧光探针的分类

1．4．3 荧光探针的作用原理

1．4．4 荧光探针的应用

1．4．5 反应型荧光探针的特点和分类

1．5 本课题的研究内容及意义

2 材料与方法

2．1 实验材料

2．2 实验仪器

2．3 过氧化氢检测

2．3．1 溶液配制及实验过程

2．3．2 实验条件的优化

2．3．3 标准曲线的绘制

2．3．4 干扰实验

2．3．5 牛百叶中过氧化氢的测定

2．4 葡萄糖的检测

2．4．1 实验过程

2．4．2 实验条件的优化

2．4．3 标准曲线的绘制

2．4．4 干扰实验

2．4．5 人血清中葡萄糖的测定

2．5 间氨基苯磺酸共轭聚合物的表征

2．5．1 间氨基苯磺酸共轭聚合物的紫外光谱图

2．5．2 问氨基苯磺酸共轭聚合物的核磁谱图

3 结果与讨论

3．1 过氧化氢检测

3．1．1 反应体系的荧光谱图

3．1．2 反应体系的紫外谱图

3．1．3 反应体系的核磁谱图

3．1．4 实验条件的优化

3．1．5 过氧化氢标准曲线的绘制

3．1．6 干扰实验

3．1．7 牛百叶中过氧化氢的测定

3．2 葡萄糖的检测

3．2．1 反应体系的荧光谱图

3．2．2 实验条件的优化

3．2．3 葡萄糖标准曲线绘制

3．2．4 干扰实验

3．2．5 人血清中葡萄糖的测定

4 结论

5 展望

参考文献

7 攻读硕士期间发表论文情况

致谢