贯叶连翘和小连翘的组织培养及分泌结构与金丝桃素类物质含量的相关性研究

摘要

贯叶连翘(HypericumperforatumL.)和小连翘(HypericumerectumThunb.)系藤黄科金丝桃属多年生草本植物，具有重要的药用价值。该属植物所含的金丝桃素、黄酮类等物质具有抗抑郁、抗病毒、抗肿瘤和增强免役等作用，从而引起医药界的广泛重视。本文在组织培养、植物化学、分泌结构与金丝桃素类物质积累的相关性方面对小连翘和贯叶连翘进行了系统的研究，获得了一些有价值的成果，填补了贯叶连翘和小连翘在该领域的空白，为贯叶连翘和小连翘的药用价值的开发利用提供了重要的科学依据。主要研究结果如下： 1.系统研究了贯叶连翘叶片、结节、茎段为外植体诱导愈伤组织的培养方法，获得了大量的愈伤组织，并分析了其金丝桃素的含量。实验表明：贯叶连翘茎段较叶容易诱导出愈伤组织；贯叶连翘愈伤组织诱导的最佳培养基为MS+6-BA2.0mg/L+NAA0.2mg/L；而MS+2，4-D1.0mg/L+6-BA0.3mg/L适合愈伤组织的继代培养。HPLC含量测定得出，叶诱导出的愈伤组织中金丝桃素的含量最高，可达0.0015％，而茎诱导出的愈伤组织中金丝桃素的含量为0.0011％。 2.系统研究了小连翘种子苗的培养方法和植株再生技术，获得了大量的愈伤组织和试管苗，建立了小连翘稳定的离体培养再生体系。结果表明：小连翘愈伤组织诱导较难，实验采用由种子萌发所获得的无菌苗的叶片、茎和根进行愈伤组织诱导；MS培养基中添加1.0mg/L的2，4-D和0.2mg/L的6-BA最适合小连翘愈伤组织的诱导；MS培养基中添加0.2mg/L的NAA和2.0mg/L的6-BA最适合小连翘丛生芽的增殖；1/2MS培养基生根数最多，且对生根小苗增高效果最好。 3.对贯叶连翘和小连翘的组织培养物进行了分泌结构和组织化学定位研究，结果表明，金丝桃素存在于分泌细胞团内，金丝桃素的积累与分泌细胞团的形成有关。在未分化的愈伤组织中，未发现分泌细胞团的存在，与HPLC测定不具有金丝桃素结果相一致。 4.对小连翘各时期的组织培养物(愈伤组织、丛生芽、生根小苗、生根小苗的叶)进行了金丝桃素类物质的含量对比研究，结果表明，愈伤组织、丛生芽、生根小苗、小苗叶片中金丝桃素的含量由低到高，其中＞5cm的小苗叶片中金丝桃素的含量最高，可高达0.00554％，与野外贯叶连翘植株中金丝桃素含量相接近。表明可以通过小连翘组织培养工业化生产金丝桃素类物质。 5.通过半薄连续切片和HPLC测定，研究了贯叶连翘和小连翘成熟叶中分泌细胞团结构与金丝桃素的积累的关系，首次提出了一个分泌细胞团和一个分泌细胞中金丝桃素类物质的含量，实验结果表明，贯叶连翘和小连翘的成熟叶片中，一个分泌细胞中伪金丝桃素的含量最高，分别占金丝桃素类物质总质量的63.12％和55.50％，金丝桃素的含量较少，分别占金丝桃素类物质的29.88％和30.04％，原金丝桃素和原伪金丝桃素仅占了金丝桃素类物质的7.0％和14.46％左右。

目录

文摘

英文文摘

论文说明：缩略词表

声明

第一章研究现状综述

1植物组织培养概述

1.1植物快速繁殖

1.2次生代谢产物的生产

2金丝桃属植物的研究进展

2.1金丝桃属植物分类和分布

2.2金丝桃属植物形态学特性

2.3金丝桃属植物化学成分的研究进展

2.4金丝桃属植物药理作用的研究进展

2.5金丝桃属植物组织培养研究

2.6金丝桃属植物分泌结构与金丝桃素含量的相关性研究

2.7贯叶连翘和小连翘研究领域存在的问题和研究意义

第二章贯叶连翘和小连翘的组织培养和快速繁殖

1贯叶连翘的组织培养

1.1实验材料

1.2实验方法

1.3结果与分析

1.4讨论

2小连翘的组织培养

2.1实验材料

2.2实验方法

2.3结果与分析

2.4讨论

第三章贯叶连翘和小连翘组培物的分泌结构和组织化学定位研究

1实验材料

2实验方法

2.1冰冻切片

2.2石蜡切片

2.3半薄切片

3结果与分析

3.1贯叶连翘解剖结构研究结果

3.2小连翘解剖结构研究结果

4讨论

第四章贯叶连翘和小连翘不同组培物中金丝桃素含量测定

1实验材料

2实验方法

2.1金丝桃素类物质的提取与分离

2.2金丝桃素标准曲线的绘制

2.3金丝桃素含量测定(HPLC)

3结果与分析

3.1贯叶连翘提取物中金丝桃素含量测定

3.2小连翘组培物提取物中金丝桃素含量测定

4讨论

4.1金丝桃素的提取方法和HPLC检测条件

4.2贯叶连翘和小连翘组培提取物中金丝桃素的含量测定

第五章贯叶连翘和小连翘分泌细胞团的结构与金丝桃素含量的相关性研究

1实验材料

2实验方法

2.1金丝桃素类物质的提取与分离

2.2金丝桃素含量测定

2.3半薄切片

2.4统计方法

3结果与分析

3.1贯叶连翘分泌细胞团的结构与金丝桃素含量的相关性研究

3.2小连翘分泌细胞团的结构与金丝桃素含量的相关性研究

4讨论

4.1贯叶连翘和小连翘成熟叶片中分泌细胞团的结构比较

4.2统计方法

4.3一个分泌细胞团和一个分泌细胞中金丝桃素类物质的含量

第六章总结

参考文献

致 谢

攻读学位期间发表的论文