双酚A和邻苯二甲酸二甲酯荧光检测试纸条的研制

摘要

本文建立了用于检测双酚A(BPA)和邻苯二甲酸二甲酯(DMP)的四种可视化荧光免疫层析试纸条快速检测方法，这四种检测方法均可用于食品和环境中两种塑化剂的可视化快速检测。 BPA量子点标记免疫层析试纸条的研制过程中，采用活化酯法制备量子点-抗体(QDs-Ab)偶联物，量子点、抗体、活化剂的最佳偶联摩尔比为1∶4∶1500，偶联体系缓冲液的最优pH为8.3;羊抗兔IgG和包被原稀释倍数分别为1∶400和1∶12;硝酸纤维素膜型号为Milipore HF135s;该方法的可视化检测限为50μg L-1;与其他结类似物无交叉反应，特异性良好;样品中BPA的可视化检测限为10μg kg-1（或μg L-1）。 BPA量子点荧光猝灭免疫层析试纸条的研制过程中，采用柠檬酸三钠还原法制备18nm的胶体金，制备胶体金和抗体复合物的最佳K2CO3添加量为10μL，最适抗体添加量为15μL;包被原和量子点-牛血清白蛋白(QDs-BSA)偶联物的稀释倍数分别为1∶12和1∶5.7;硝酸纤维素膜型号为Milipore HF135s;该方法的可视化检测限为20μg L-1;与其他结构类似物之间无交叉反应，特异性好;样品中BPA的可视化检测限为4μg kg-1（或μg L-1）;所建立的方法的测定结果与高效液相色谱法的测定结果一致，准确性良好。 DMP量子点荧光猝灭免疫层析试纸条的研制过程中，制备胶体金和抗体复合物的最佳K2CO3添加量为5μL，最适抗体添加量为10μL;包被原和量子点-鸡卵白蛋白(QDs-OVA)偶联物的稀释倍数分别为1∶2和1∶6;硝酸纤维素膜型号为Milipore HF135s;该方法的可视化检测限为20μg L-1;与其他邻苯二甲酸酯类无交叉反应，特异性好;样品中DMP的可视化检测限为4μg kg-1（或μg L-1）;所建立的方法的测定结果与气相色谱串联质谱法的测定结果一致，准确性良好。 DMP和BPA多残留荧光猝灭免疫层析试纸条是在单一组分试纸条方法基础上，对BPA和DMP两种金标抗体的连接方式以及两种物质的划线顺序进行了优化，最终确定为单独标记两种抗体后混合进行检测，划膜顺序从上到下依次为质控线、DMP检测线、BPA检测线;DMP和BPA在该方法中的检测限分别为100μg L-1、50μg L-1;DMP和BPA在水样品中的可视化检测限分别为100μg L-1、50μg L-1。

目录

声明

摘要

1前言

1．1塑化剂概述

1．2．1双酚A基本性质

1．2．2双酚A的毒性

1．2．3双酚A的限量标准

1．2．4双酚A国内外检测方法研究进展

1．3邻苯二甲酸二甲酯概述

1．3．1邻苯二甲酸二甲酯的基本性质

1．3．2邻苯二甲酸二甲酯的毒性

1．3．3邻苯二甲酸二甲酯的限量标准

1．3．4邻苯二甲酸二甲酯国内外检测方法研究进展

1．4荧光能量共振转移技术简介及应用

1．5免疫层析技术简介

1．5．1量子点标记免疫层析试纸条

1．5．2量子点荧光猝灭免疫层析试纸条

1．6本实验研究目的及意义

1．7本实验研究内容

2材料与方法

2．1实验材料

2．1．1主要试剂与药品

2．1．2实验设备与仪器

2．1．3主要溶液的配制

2．2．1抗体的纯化

2．2．2双酚A包被原的合成

2．2．3抗体、包被原的筛选及有效性验证

2．2．4量子点标记抗体的制备

2．2．5双酚A量子点标记免疫层析试纸条检测方法的建立

2．2．6量子点标记免疫层析试纸条的组装

2．2．7量子点标记免疫层析试纸条的检测原理与结果判定

2．2．8双酚A量子点标记免疫层析试纸条的检测限

2．2．9双酚A量子点标记免疫层析试纸条的特异性

2．2．10双酚A量子点标记免疫层析试纸条实际样品的检测

2．2．11胶体金的制备

2．2．12胶体金标记抗体的制备

2．2．13量子点标记蛋白的制备方法

2．2．14双酚A量子点荧光猝灭免疫层析试纸条检测方法的建立

2．2．15量子点荧光猝灭免疫层析试纸条的组装

2．2．16量子点荧光猝灭免疫层析试纸条的检测原理与结果判定

2．2．17双酚A量子点荧光猝灭免疫层析试纸条的检测限

2．2．18双酚A量子点荧光猝灭免疫层析试纸条的特异性

2．2．19双酚A量子点荧光猝灭免疫层析试纸条实际样品的检测

2．2．20双酚A高效液相色谱法(HPLC)验证试验

2．2．21邻苯二甲酸二甲酯包被抗原的制备

2．2．22邻苯二甲酸二甲酯量子点荧光猝灭免疫层析试纸条检测方法的建立

2．2．23邻苯二甲酸二甲酯量子点荧光猝灭免疫层析试纸条的检测限

2．2．24邻苯二甲酸二甲酯量子点荧光猝灭免疫层析试纸条的特异性

2．2．25邻苯二甲酸二甲酯量子点荧光猝灭免疫层析试纸条实际样品的检测

2．2．26邻苯二甲酸二甲酯GC-MS验证试验

2．2．27 DMP和BPA多残留量子点荧光猝灭免疫层析试纸条检测方法的建立

2．2．28 DMP和BPA多残留量子点荧光猝灭免疫层析试纸条的检测限

2．2．29 DMP和BPA多残留量子点荧光猝灭免疫层析试纸条实际样品的检测

3结果讨论

3．1．1双酚A抗体与包被原的选择

3．1．2量子点偶联抗体最佳条件的确定

3．1．3量子点免疫层析试纸条工作条件的确定

3．1．4双酚A量子点标记免疫层析试纸条可视化检测限的确定

3．1．5双酚A量子点标记免疫层析试纸条特异性的确定

3．1．6双酚A量子点标记免疫层析试纸条实际样品的检测

3．2．1胶体金质量鉴定

3．2．2胶体金标记抗体的制备

3．2．3双酚A量子点荧光猝灭免疫层析试纸条工作条件的确定

3．2．4双酚A量子点荧光猝灭免疫层析试纸条的可视化检测限的确定

3．2．5双酚A量子点荧光猝灭免疫层析试纸条特异性的确定

3．2．6双酚A量子点荧光猝灭免疫层析试纸条实际样品的检测

3．3．1 HPLC标准曲线的建立

3．3．2 HPLC与双酚A荧光免疫层析试纸条样品测定结果

3．4邻苯二甲酸二甲酯量子点荧光猝灭免疫层析试纸条

3．4．1胶体金标记抗体的优化

3．4．2邻苯二甲酸二甲酯量子点荧光猝灭免疫层析试纸条工作条件的确定

3．4．3邻苯二甲酸二甲酯量子点荧光猝灭免疫层析试纸条的检测限的确定

3．4．4邻苯二甲酸二甲酯量子点荧光猝灭免疫层析试纸条特异性的确定

3．4．5邻苯二甲酸二甲酯量子点荧光猝灭免疫层析试纸条实际样品的检测

3．5 GC-MS验证邻苯二甲酸二甲酯量子点荧光猝灭免疫层析试纸条的有效性

3．5．2 GC-MS与邻苯二甲酸二甲酯量子点荧光猝灭免疫层析试纸条样品测定结果

3．6 DMP和BPA多残留量子点荧光猝灭免疫层析试纸条

3．6．1 DMP和BPA多残留量子点荧光猝灭免疫层析试纸条检测方法的建立

3．6．2 DMP和BPA多残留量子点荧光猝灭免疫层析试纸条检测限的确定

3．6．3 DMP和BPA多残留量子点荧光猝灭免疫层析试纸条实际样品的检测

4结论

4．1全文总结

4．2论文的创颏点

4．3论文的不足之处

5展望

参考文献

7攻读硕士学位期间发表论文情况

致谢