Mammosphere低表达蛋白GIPC1干扰对MCF-7乳腺癌细胞蛋白表达的影响

摘要

乳腺癌是最常见的恶性肿瘤之一。随着肿瘤干细胞概念的提出,以及实体瘤中肿瘤干细胞的成功分离,人们越来越相信肿瘤干细胞是肿瘤的生长,恶化和转移的内在原因。本实验室已经利用乳腺癌细胞系MCF-7在体外培养出了mammosphere,并利用蛋白质组学技术对mammosphere和MCF-7细胞进行差异蛋白质组学研究,共鉴定出34个具有表达差异的蛋白质点,其中GIPC1(G-protein signaling-GAIP-interacting protein COOHterminus)蛋白在mammosphere中表达下调。
　　 GIPC1含有PDZ结构域,是细胞中重要的支架蛋白,与蛋白质的运输定位、膜受体蛋白的成簇、信号转导及膜泡运输等有关。为了研究GIPC1蛋白在细胞中的功能及其对mammosphere形态及生长的影响,实验利用慢病毒介导的RNA干扰技术干扰肿瘤干细胞mammosphere低表达蛋白GIPC1的表达,并通过荧光显微镜观察和免疫印迹对其验证。实验对稳定低表达细胞株和阴性对照细胞株进行mammosphere培养观察GIPC1的干扰后mammosphere的形态变化,结果显示GIPC1的低表达并没有引起mammosphere的形态学的明显变化。为了研究GIPC1蛋白低表达对于MCF-7细胞蛋白表达的影响,实验通过差异蛋白质组学分析共找到16个差异表达蛋白,利用MALDI-TOF-TOF质谱鉴定出其中12个。包括与细胞骨架、糖代谢、核苷酸代谢、线粒体分裂相关蛋白、信号转导蛋白及干细胞分子标记蛋白等。这为解释GIPC1在细胞中的功能及在信号通路中的作用提供了参考。