壮观链霉菌非大观霉素抑菌组分的分离纯化与鉴定

摘要

壮观链霉菌(Streptomyces spectabilis)LXR1H-8是通过基因组重排技术和传统诱变相结合的方法选育的突变菌株,多次发酵验证,其发酵液的抑菌活性显著提高且抑菌谱发生变化。
　　 本文采用树脂分离和乙酸乙酯萃取的方法对发酵液中的抑菌组分粗提取,并研究了pH值对树脂吸附和萃取的影响,洗脱剂及浓度的选择;乙酸乙酯4 L萃取洗脱液3次,浓缩蒸干获得2.00 g棕色粗提物,用甲醇溶解样品上柱吸附,MCI柱色谱分离粗提物获得4个部分A、B、C和D,洗脱液为甲醇-水(20:80至80:20),其中A、B部分无抑菌活性,C和D部分有抑菌活性。采用硅胶柱色谱分离C(860mg)获得4个有抑菌活性的部分C1、C2、C3和C4,洗脱液为氯仿-甲醇(16:1至10:1),采用薄层层析和管碟法(指示菌为Sarcina lutea)跟踪C1中的抑菌组分,样品C1经凝胶HW-40C柱色谱、RP-18柱色谱分离,半制备液相Sepax Biol-C18(5μm,250×30 mmψ)纯化,洗脱液为甲醇-水(48:52)。减压浓缩除去溶剂获得1.3 mgⅡa-1和3.3 mgⅡα-2°利用硅胶柱色谱分离C2,洗脱液石油醚-丙酮(1:1),凝胶HW-40C株层析纯化C2,洗脱液为甲醇。采用生物自显影方法和薄层层析的方法跟踪C2中的抑菌组分,最后获得Cv23.00 mg。样品Ⅱa-2进行1D NMR和2D NMR分析;样品Cv2进行1D NMR分析,两个样品均进行液质联用(LC-MS)分析。
　　 根据图谱分析,鉴定Ⅱa-2为芳香酯类化合物,推测是曲张链丝菌素的结构类似物,其分子量为753。Cv2的分子量为1448。