黄樱椒化学成分的提取分离及辣椒素类似物活性研究

摘要

黄樱椒是朝天小辣椒家族中的一个新品种，属于茄科、辣椒属植物。本文对黄樱椒化学成分进行了提取，分离和减肥活性检测，实验结果表明辣椒素是黄樱椒减肥活性的主要成分;本文制备了辣椒素分子印迹聚合物，并考察了此聚合物对辣椒素的固相萃取能力，为辣椒素的分离纯化提供了新的技术手段;最后我们采用胃癌细胞模型，探索了辣椒素抗胃癌机制，并研究了辣椒素抑制胃癌细胞生长的构效关系。
　　文章第一部分研究了黄樱椒不同组分提取物对3T3-L1前脂肪细胞增殖和分化的影响，实验结果表明黄樱椒提取物各组分对3T3-L1脂肪细胞的增殖和分化均有抑制作用，并随浓度的升高，抑制作用增强，其中乙酸乙酯组分抑制能力最强，石油醚组分其次，正丁醇组分最弱。其中正丁醇组分经进一步分离，得到A-E五个组分，实验结果显示A和B组分较正丁醇组分活性有所提高。其中A组分经SephadexLH-20和半制备液相分离得到L-尿苷。
　　文章第二部分以辣椒素为模板分子，采用本体聚合法合成以2-乙烯吡啶(2-VP)、丙烯酰胺（AM）为功能单体的辣椒素分子印迹聚合物。采用平衡结合实验评价其对辣椒素的特异性吸附能力;吸附动力学试验评价其对辣椒素的饱和吸附时间;选择性吸附试验评价其对辣椒素类似物的选择性吸附能力。结果表明，当辣椒素与2-乙烯吡啶、丙烯酰胺比例为1∶2∶2时，分子印迹聚合物对辣椒素的吸附效果最佳，其吸附容量为20.46mg/g，识别因子α=3.05;饱和吸附时间为6h;且对辣椒素有较好的选择吸附性。采用分子印迹聚合物对辣椒素进行固相萃取，考察了极性不同的淋洗剂对辣椒素特异性吸附和非特异性吸附的洗脱效果，发现以极性较小的氯仿作为淋洗剂时能较大限度保留MIP固相萃取柱中辣椒素的特异性吸附，并除去非特异性吸附。
　　文章第三部分对辣椒素类似物抑制细胞增殖的构效关系进行了研究，MTT实验结果表明辣椒素类似物活性顺序以依次为二氢辣椒素＞辣椒素＞6-姜酚≥香兰素＞香兰素胺，同时也进一步表明辣椒素B和C基团是辣椒素活性必须基团。紧接着我们对辣椒素类似物诱导胃癌细胞凋亡的氧化应激机制进行了研究。用辣椒素及其类似物处理胃癌细胞后，细胞内的ROS及MDA水平急剧增加，同时细胞内抗氧化物酶SOD和GXH-Px的活性显著提高，而抗氧化物酶CAT的活性却显著下调。因此，我们推断用辣椒素及其类似物处理胃癌细胞后，细胞内CAT活性下调是辣椒素及其类似物诱导胃癌细胞产生氧化应激及凋亡的原因。

目录

声明

摘要

第一章 绪论

第一节 辣椒化学成分及辣椒素生物活性研究进展

1．1 辣椒化学成分研究进展

1．2 辣椒素生物活性研究进展

第二节 分子印迹聚合物的制备及研究进展

2．1 前言

2．2 分子印迹聚合物的制备过程

2．3 分子印迹技术的分类

2．4 常用的分子印迹聚合方法

2．5 分子烙印聚合物的应用

第三节 选题的目的与意义

第四节 文章创新点

第二章 黄樱椒化学成分提取分离及其减肥活性研究

2．1 前言

2．2 实验部分

2．2．1 实验材料与试剂

2．2．2 提取分离流程

2．2．3 减肥活性试验

2．2．4 实验结果与讨论

2．3 本章小结

第三章 辣椒素分子印迹聚合物的制备及其在固相萃取中的应用

3．1 前言

3．2 实验部分

3．2．1 试剂与仪器

3．2．2 辣椒素分子印迹聚合物的制备

3．2．3 饱和吸附试验

3．2．4 吸附动力学试验

3．2．5 平衡结合实验

3．2．6 选择性吸附试验

3．2．7 固相萃取实验

3．3 结果与分析

3．3．1 功能单体与致孔剂的选择

3．3．2 饱和吸附试验

3．3．3 吸附动力学试验

3．3．4 平衡结合实验

3．3．5 选择吸附性实验

3．3．6 固相萃取实验

3．4 讨论

3．5 本章小结

第四章 辣椒素类似物构效关系及其诱导胃癌细胞凋亡的氧化应激机制研究

4．1 前言

4．2 实验材料和方法

4．2．1 实验材料与仪器

4．2．2 细胞复苏

4．2．3 细胞传代

4．2．4 细胞计数

4．2．5 MTT法检测细胞增殖

4．2．6 流式细胞仪检测细胞凋亡

4．2．7 细胞内ROS含量测定

4．2．8 细胞内丙二醛(MDA)的检测

4．2．9 细胞内SOD的检测

4．2．10 Bradford法测定蛋白浓度

4．2．11 谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX)活性测定

4．2．12 过氧化氢酶(Catalase，CAT)活性测定

4．3 结果与分析

4．3．1 辣椒素类似物对细胞增值的影响

4．3．2 辣椒素类似物对细胞凋亡的影响

4．3．3 辣椒素类似物对细胞内ROS的影响

4．3．4 辣椒素及其类似物对细胞内MDA含量及抗氧化酶活性的影响

4．4 讨论

4．5 本章小结

参考文献

致谢

攻读硕士学位期间发表的论文