复方葫芦巴种子提取物对胰岛素抵抗糖脂代谢紊乱模型大鼠的作用及机制初探

摘要

目的:比较复方葫芦巴种子提取物(CFSE)对两种胰岛素抵抗糖脂代谢紊乱模型大鼠的抗糖尿病(DM)作用，并对其中的地塞米松诱导的胰岛素抵抗糖脂代谢紊乱模型的作用机制进行了初步研究，为CFSE的临床应用作前期基础研究。 方法:按“国食药监保化[2012]107号”文件的两种胰岛素抵抗糖脂代谢紊乱模型进行造模并给药，观察给药组与模型对照组(MC)的异常，试验结束，测定各组大鼠空腹血糖值(FBG)、糖耐量(OGTT)、总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、空腹胰岛素(FINS)、糖化血红蛋白（HbA1c）、高密度脂蛋白(HDL)和低密度脂蛋白(LDL)的值;运用Western blot法检测各组大鼠肌肉组织胰岛素受体底物蛋白1(IRS1)、葡萄糖转运蛋白4(GLUT4)蛋白的表达和脂肪组织中过氧化物酶体增殖物激活受体γ（PPARγ）蛋白的表达。 结果:两种模型均可复制，具体表现在:两种模型大鼠的FBG和正常对照组(NC)大鼠比较无明显差异（P＞0.05），但MC大鼠0.5小时血糖值≥10mmol/L，或MC大鼠0.5h、2h任一时间点血糖升高或血糖曲线下面积(AUC)升高，与NC比较，差异有显著性(P＜0.05)。两种模型的MC大鼠空腹血清TC、TG明显升高，与NC比较，差异均有显著性(P＜0.01)，两种模型脂代谢紊乱复制成功;两种模型MC与NC比较胰岛素抵抗指数(HOMO-IR)无明显下降（P＞0.05），且动物糖脂代谢紊乱成立，说明胰岛素抵抗糖脂代谢紊乱模型复制成功。对于地塞米松诱导胰岛素抵抗糖脂代谢紊乱模型，CFSE能改善其糖耐量异常(IGT)情况:CFSE高、低剂量组均能明显降低模型大鼠的0.5h血糖值及AUC，与MC比较，差异有显著性(P＜0.01)，对TC、TG、FINS、HOMO-IR、HbA1c、HDL和LDL值无明显作用，与MC比较，差异均无显著性(P＞0.05);对于四氧嘧啶诱导胰岛素抵抗糖脂代谢紊乱模型无明显作用:CFSE低剂量组能升高HDL值，与MC比较，差异有显著性(P＜0.05)，除此之外，CFSE对此模型TC、TG、FINS、HOMO-IR、HbA1c、HDL和LDL值无明显作用，与MC比较，差异均无显著性(P＞0.05)。Western blot实验表明，CFSE对肌肉组织IRS1的表达无明显作用，与MC比较，差异无显著性（P＞0.05），但有增加IRS1蛋白表达的趋势;CFSE两剂量均能提高肌肉组织和脂肪组织中GLUT4蛋白的表达，与MC比较，差异有显著性(P＜0.05);CFSE两剂量均能提高脂肪组织的PPARγ蛋白的表达，与MC比较，差异有显著性（P＜0.05）。 结论:本研究成功复制了两种胰岛素抵抗糖脂代谢紊乱模型大鼠，证实CFSE具有抗DM和改善胰岛素抵抗(IR)的作用;其作用机制可能是通过上调PPARγ蛋白的表达，抑制炎症因子的释放和激活PI3K通道，抑制IRS1(Ser307)磷酸化，增加GLUT4蛋白表达相互作用的结果，最终起到抗DM和改善IR的作用。

目录

声明

摘要

缩略词表

第一章 绪论

引言

1．1 DM的分型、并发症、临床症状

1．2 DM的临床用药及其新药研发情况

1．2．1 西药

1．2．2 中药

1．2．3 治疗原则

1．3 抗糖尿病药物筛选模型

1．3．1 自发性糖尿病动物模型

1．3．2 实验诱导糖尿病动物模型

1．4 本课题的研究背景

1．4．1 胰岛素抵抗糖／脂代谢紊乱模型的研究背景

1．4．2 CFSE的研究背景

1．4．3 CFSE临床应用与前景

第二章 CFSE对胰岛素抵抗糖脂代谢紊乱模型大鼠的作用

2．1 实验材料

2．1．1 实验动物

2．1．2 实验试剂

2．1．3 主要仪器

2．1．4 主要试剂配制

2．2 实验方法

2．2．1 实验动物造模：化学药物联合特殊膳食诱导

2．2．2 实验动物分组及给药

2．2．3 空腹血糖的测定及葡萄糖耐量实验

2．2．4 甘油三酯和总胆固醇含量测定

2．2．5 空腹胰岛素水平和胰岛素敏感指数测定

2．2．6 糖化血红蛋白，高、低密度脂蛋白测定

2．2．7 统计学分析

2．3 实验结果

2．3．1 实验动物状态观察

2．3．2 实验动物给药期间体重变化

2．3．3 CFSE对大鼠血糖的影响

2．3．4 CFSE对大鼠血清TC和TG的影响

2．3．5 CFSE对大鼠血清胰岛素的影响

2．3．6 CFSE对HbAlc的影响

2．3．7 CFSE对HDL、LDL的影响

2．4 讨论

2．4．1 两模型的比较

2．4．2 CFSE对血糖的影响

2．4．3 CFSE对血脂的影响

2．4．4 CFSE对胰岛素的影响：FINS、HOMA-IR

2．4．5 本课题两模型的缺点

2．5 结论

第三章 CFSE对胰岛素信号通路及PPAR γ的影响

3．1 实验材料

3．1．1 实验试剂

3．1．2 实验仪器

3．1．3 主要试剂配制

3．2 实验方法

3．2．1 蛋白的提取及定量

3．2．2 免疫印迹法检测相关蛋白含量

3．2．3 ECL化学显影

3．2．4 统计学分析

3．3 实验结果

3．3．1 肌肉组织中IRS1、GLUT4蛋白Western Blot实验结果

3．3．2 脂肪组织中PPARγ和GLUT4蛋白Western Blot实验结果

3．4 讨论

3．4．1 对胰岛索信号通路的作用

3．4．2 对炎症因子的作用

3．4．3 两者的相互作用

3．4．4 本课题的不足之处

3．5 结论

第四章 讨论与结论

4．1 讨论

4．1．1 本课题模型的特点

4．1．2 CFSE对胰岛素抵抗糖脂代谢紊乱模型大鼠的作用

4．2 结论

参考文献

致谢

攻读硕士学位期间发表论文情况