浙贝母提取物对异丙肾上腺素诱导H9c2心肌细胞肥厚的干预作用及机制研究

摘要

目的:观察异丙肾上腺素(Iso)诱导H9c2心肌细胞肥厚中Toll样受体4（TLR4）/激活蛋白1（activator protein-1，AP-1）信号通路及肿瘤坏死因子(TNF-α)、白介素6（IL-6）的改变，探讨研究浙贝母提取物对Iso致心肌肥厚的干预作用及机制。
　　方法:(1)MTT法检测Iso、浙贝母提取物、卡托普利对H9c2心肌细胞存活率的影响，确定它们的安全浓度范围。(2)在Iso对H9c2心肌细胞安全浓度范围中，设立浓度梯度，筛选出最佳造模浓度。(3)采用结晶紫染色，倒置荧光显微镜观察细胞形态，image-pro plus6.0软件测量各处理组心肌细胞的面积。(4)二辛可酸(BCA)法测定各组细胞总蛋白含量。(5)酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测细胞外液中肿瘤坏死因子(TNF-α)、白介素6（IL-6）的浓度。(6)Western blot检测TLR4、AP-1、心钠肽(ANP)蛋白的表达。
　　结果:(1)Iso对H9c2心肌细胞的安全浓度范围在30μmol/L之内;浙贝母提取物对H9c2心肌细胞的安全浓度范围在2000μg/mL之内;卡托普利对H9c2心肌细胞的安全浓度范围在0.2m mol/L之内。(2)Iso的最佳造模浓度为20μmol/L。(3)模型组中的H9c2心肌细胞表面积高于其他各组，并与正常组的差异有显著性意义(P＜0.001)，浙贝母提取物高剂量组的H9c2心肌细胞表面积有所变小，其对心肌细胞肥厚有保护作用。(4)模型组的总蛋白含量高于其他各组，与正常组的比较差异有显著性意义(P＜0.001)，阳性对照组的总蛋白含量接近于正常组。(5)模型组中细胞培养液中TNF-α、IL-6的浓度升高，高剂量组中的有所降低，并与模型组的差异有显著性意义(P＜0.001)。(6)模型组中ⅡR4、AP-1、ANP蛋白表达上调，高剂量组和阳性对照组中这些蛋白的表达均降低下调。
　　结论:浙贝母提取物对Iso致H9c2心肌细胞肥厚具有一定的保护作用，其机制可能与减少TNF-α、IL-6的释放，抑制TLR4/AP-1信号通路减轻心肌肥厚的炎症反应有关。

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摘要

缩略词简表(Abbreviations)

第一章 绪论

1．1 心肌肥厚类型

1．2 心肌肥厚相关机制

1．2．1 机械应力感受器

1．2．2 甲状腺激素／甲状腺激素受体信号

1．2．3 胰岛素生长因子—1／胰岛素生长因子—1受体／Akt信号

1．2．4 活化T细胞钙调磷酸酶核因子(NFAT)信号

1．2．5 β-肾上腺素能受体信号和Ca2+／钙调蛋白依赖性激酶Ⅱ信号

1．2．6 cGMP／蛋白激酶G信号

1．2．7 蛋白激酶C和丝裂原活化蛋白激酶信号

1．2．8 胰岛素／胰岛素受体(IR)／Akt信号

1．3．1 自噬

1．3．2 微小RNA

1．3．3 内皮细胞

1．3．4 细胞因子

1．4．心肌肥厚的治疗药物

1．4．1 他汀类药物

1．4．2 血管紧张素转换酶抑制剂

1．4．3 血管紧张素Ⅱ受体Ⅰ阻断剂

1．4．4 钙离子通道阻滞剂

1．4．5 利尿剂

1．4．6 中药类药物

1．5．小结与展望

第二章 浙贝母提取物对异丙肾上腺素诱导H9c2心肌细胞肥厚的干预作用及机制研究

2．1 引言

2．2 实验材料

2．2．1 细胞株

2．2．2 试剂材料

2．3 实验方法

2．3．1 细胞培养

2．3．2 不同浓度异丙肾上腺素对H9c2心肌细胞存活率的影响

2．3．3 不同浓度浙贝母提取物对H9c2心肌细胞存活率的影响

2．3．4 不同浓度卡托普利对H9c2心肌细胞存活率的影响

2．3．5 H9c2心肌细胞肥厚模型的建立

2．3．6 各组心肌细胞表面积的测定

2．3．7 BCA法测各组心肌细胞总蛋白含量

2．3．8 ELISA法检测各组心肌细胞外液TNF-α含量

2．3．10 Western blot检测ANP、TLR4、AP-1蛋白表达情况

2．3．11 统计处理

2．4 实验结果

2．4．1 不同浓度异丙肾上腺素对H9c2心肌细胞存活率的影响

2．4．2 不同浓度浙贝母提取物对H9c2心肌细胞存活率的影响

2．4．3 不同浓度卡托普利对H9c2心肌细胞存活率的影响

2．4．4 H9c2心肌细胞肥厚模型的建立

2．4．5 各处理组心肌细胞表面积的测定

2．4．6 二辛可酸(BCA)法测定各组细胞总蛋白含量

2．4．7 ELISA法测量心肌细胞外液中肿瘤坏死因子(TNF-α)含量

2．4．8 ELISA法测量心肌细胞外液中自介素6(IL-6)含量

2．4．9 Western blot检测H9c2心肌细胞中ANP、TLR4、AP-1蛋白表达情况

2．5 讨论

2．5．1 异丙肾上腺素(Iso)在心肌肥厚发展中的作用

2．5．2 TLR4／AP-1信号通路及炎症因子与心肌肥厚的关系

2．5．3 浙贝母提取物对心肌肥厚的防治作用

总结与展望

参考文献

硕士期间发表的论文和专利