水飞蓟中有效成分的分离制备及其抗氧化活性

摘要

水飞蓟是菊科水飞蓟属的药用植物，作为保肝药用植物在我国推广，其主要有效成分为几种二氢黄酮类同分异构体。据大量研究表明水飞蓟素具有清除活性氧、对抗脂质过氧化、抗肝毒素、促进肝细胞修复、抗肿瘤、降血脂等药理学活性。为系统地研究水飞蓟中的几种有效活性成分，本论文对其进行了提取、分离以及结构鉴定，并进行了初步的抗氧化活性研究。 采用超声波辅助的乙酸乙酯浸提法提取脱脂的水飞蓟种子，提取液旋转蒸发除去乙酸乙酯得到水飞蓟提取物，然后用高速逆流色谱法对水飞蓟中有效成分进行分离纯化。水飞蓟素高速逆流色谱法分离分别采用溶剂系统A：石油醚-乙酸乙酯-甲醇-水(1：4：3：4，V/V)，分离得到水飞蓟亭(单体I)和组分二；组分二再经过溶剂系统E：TMBE-甲醇-水=2：1：1，V/V)，分离得到水飞蓟宁(单体II)、水飞蓟宾和异水飞蓟宾。该方法与文献报道的传统的方法比较，有进样量大、回收率高等特点。 用制备型高效液相色谱法从水飞蓟宾和异水飞蓟宾分离得到水飞蓟宾A(单体III)、水飞蓟宾B(单体IV)、异水飞蓟宾A(单体V)和水飞蓟宾B(单体VI)。该方法适用于以上单体标准品的制备。 上述六种单体成分的化学结构均通过ESI-MS和NMR等方法进行了鉴定。 采用DPPH法和邻苯三酚自氧化法评价了水飞蓟提取物及单体I-VI的抗氧化活性，实验结果表明，与Vc比较水飞蓟宾A、水飞蓟宾B、异水飞蓟宾A、异水飞蓟宾B的抗氧化活性不高；但在较高浓度(>40.0μg/mL)下，水飞蓟素、水飞蓟宁和水飞蓟亭有一定的DPPH自由基和超氧阴离子自由基清除能力。水飞蓟素的抗氧化活性主要来自水飞蓟宁和水飞蓟亭的贡献。 以上成果，可以为水飞蓟素生物活性的进一步研究提供技术支持和科学依据。

目录

文摘

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附图

第1章前言

1.1水飞蓟药用历史、药理作用研究与现代临床研究

1.1.1药用历史

1.1.2药理作用研究

1.1.3现代临床研究

1.2水飞蓟中的生物活性成分

1.3水飞蓟素中有效成分分离的研究现状

1.4本课题的研究目标和研究思路

第2章 水飞蓟素的提取

2.1实验材料

2.1.1原料

2.1.2仪器

2.1.3试剂

2.2实验方法

2.3结果与讨论

2.3.1水飞蓟素在种仁和种皮部位的分布

2.3.2不同溶剂和不同提取方法对水飞蓟素提取率的影响

2.4 小 结

第3章 高速逆流色谱法分离水飞蓟素

3.1溶剂系统的选择

3.1.1实验材料

3.1.2实验方法

3.1.3结果与讨论

3.1.4 小结

3.2 HSCCC分离水飞蓟素

3.2.1实验材料

3.2.2实验方法

3.2.3结果与讨论

3.2.4 小 结

第4章 制备型高效液相纯化HSCCC各组分

4.1实验材料

4.1.1仪器

4.1.2试剂

4.2实验方法

4.2.1制备型高效液相色谱的条件摸索

4.2.2制备型HPLC纯化分离HSCCC分离所得的各组分及各单体的纯度分析

4.3结果与讨论

4.3.1制备型高效液相色谱的条件摸索结果

4.3.2制备型高效液相色谱法纯化分离所得各单体的UPLC分析

4.4 小结

第5章 结构鉴定

5.1实验材料

5.1.1仪器

5.1.2试剂

5.2实验方法

5.2.1 ESI-MS分析

5.2.2 NMR分析

5.3结果与讨论

5.3.1化合物Ⅰ

5.3.2化合物Ⅱ

5.3.3化合物Ⅲ

5.3.4化合物Ⅳ

5.3.5化合物Ⅴ

5.3.6化合物Ⅵ

5.4小结

第6章 抗氧化生物活性研究

6.1材料与方法

6.1.1仪器

6.1.2试剂

6.2实验方法

6.2.1 DPPH自由基清除实验

6.2.2超氧阴离子自由基清除实验

6.3结果与讨论

6.3.1 DPPH自由基清除效果

6.3.2超氧阴离子自由基清除效果

6.4 小 结

第7章总结

参考文献

波谱附图

攻读学位期间发表论文

致谢