乌药中挥发油及生物碱成分的分离分析方法研究

摘要

乌药作为我国的传统中药材，以产自浙江天台地区为道地药材，素有天台乌药之称，具有广泛的药理活性，其活性成分主要为挥发油、生物碱和呋喃倍半萜及其内酯三大类。目前国内外研究主要集中于呋喃倍半萜及其内酯，而对于挥发油和生物碱类成分的研究相对较少。研究表明乌药中的挥发油成分具有抗菌，抗肿瘤以及调节肠胃功能等作用，生物碱成分具有抗炎，抗氧化以及抗癌等作用。然而乌药中挥发油及生物碱的成分复杂，且含量较低，利用传统的分离分析方法效率不高。本论文采用气质联用技术，液质联用技术及高速逆流色谱技术等现代分离分析方法，针对天台乌药中的挥发油及生物碱成分进行研究。研究内容和结果如下:
　　1、采用传统的蒸馏法提取天台乌药中的挥发油成分，分别考察浸泡时间，料液比，提取时间对提取效果的影响，得到最优提取工艺为:浸泡时间3h，液料比12 mL/g，提取时间3h。研究建立了乌药挥发油化学成分的气质联用分析方法，通过标准谱库检索并与相关文献进行比对，确定了挥发油中的39个化学成分。结果表明此方法分析速度快，且对含量较低的挥发性成分也有较好的分析效果，适用于天台乌药中挥发油成分的分析。
　　2、采用超声辅助溶剂法提取天台乌药中的有效成分，通过酸水碱化处理，再经萃取得到生物碱提取物。通过优化流动相、流速等参数，建立天台乌药中生物碱类化合物的高效液相色谱分析方法。在此条件下建立液质联用快速分析方法，根据高效液相色谱-高分辨飞行时间质谱获得的精确分子量确定化合物的分子式，再经过二级质谱得到的结构碎片进行解析，分析鉴定了天台乌药生物碱提取物中的6个化合物分别为深山黄堇碱、降波尔定碱、前荷叶碱、去甲异波尔定、波尔定碱和网脉番荔枝碱，并在此基础上总结天台乌药中异喹啉类生物碱的质谱裂解规律。实验结果表明该方法灵敏度高，分析速度快，特别适用于天台乌药中的微量生物碱类化合物的快速筛选与检测。
　　3、研究建立了天台乌药中生物碱类化合物的高速逆流色谱分离方法。采用正丁醇-乙酸乙酯-0.5％乙酸(4∶1∶5，v/v)为两相溶剂体系，一次性从400 mg生物碱提取物中分离得到28.6 mg去甲异波尔定和7.2 mg波尔定碱，纯度分别为95.27％和93.61％。通过核磁共振技术确证了两个化合物单体的化学结构。实验结果表明高速逆流色谱法分离得到的单体化合物纯度较高，具有分离效率高，制备量大等优点，是一种高效的制备型分离方法，适合用于天台乌药中生物碱类化合物的分离纯化。

目录

摘要

第1章 引言

1．1 乌药的研究概况

1．1．1 乌药的化学成分

1．1．2 乌药的药理作用

1．1．3 乌药的应用

1．2 乌药中挥发油及生物碱的提取技术

1．2．1 挥发油的提取技术

1．2．2 异喹啉类生物碱的提取技术

1．3 气相色谱-质谱联用技术

1．4 液相色谱-质谱联用技术

1．5 逆流色谱技术

1．5．1 高速逆流色谱技术在分离生物碱类化合物中的应用

1．6 研究目的和意义

1．7 研究内容

第2章 乌药挥发油成分的提取及气质联用分析

2．1 仪器与试剂

2．1．1 实验材料

2．1．2 主要试剂

2．1．3 仪器设备

2．2 实验方法

2．2．1 乌药挥发油成分的提取方法

2．2．2 乌药挥发油提取方法的优化

2．2．3 数据处理

2．2．4 乌药挥发油成分的分析方法

2．2．5 数据处理

2．3 结果与分析

2．3．1 乌药挥发油提取条件的优化

2．3．2 乌药挥发油成分的提取效果

2．3．3 乌药挥发油气质联用条件的优化

2．3．4 乌药挥发油的化学成分分析

2．4 小结

第3章 乌药中生物碱类化合物的HPLC-ESI-MS／MS分析

3．1 仪器与试剂

3．1．1 实验材料

3．1．2 主要试剂

3．1．3 仪器设备

3．2 实验方法

3．2．1 乌药生物碱的提取方法

3．2．2 高效液相色谱分析

3．2．4 高效液相色谱-串联质谱分析

3．3 结果与分析

3．3．1 乌药生物碱的提取方法研究

3．3．2 高效液相色谱分析方法的确立

3．3．3 高效液相色谱-高分辨质谱联用分析

3．3．4 高效液相色谱-串联质谱分析

3．3．5 乌药生物碱的质谱裂解分析

3．3．6 乌药生物碱的质谱裂解规律

3．4 小结

第4章 乌药生物碱成分的高速逆流色谱分离方法研究

4．1 仪器与试剂

4．1．1 实验材料

4．1．2 主要试剂

4．1．3 仪器设备

4．2 实验方法

4．2．1 乌药生物碱的提取

4．2．2 高速逆流色谱分离方法的建立

4．2．3 高效液相色谱分析

4．2．4 结构鉴定

4．3 结果与分析

4．3．1 两相溶剂体系的选择

4．3．2 高速逆流色谱条件的优化

4．3．3 高速逆流色谱的分离效果

4．3．4 化合物的结构鉴定

4．4 小结

第5章 结论、创新点与展望

5．1 结论

5．2 创新

5．3 展望

参考文献

附录

致谢

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