葫芦科植物病毒研究Ⅰ：主要病毒鉴定与基因组分析Ⅱ：病毒生态学和致病性研究

摘要

葫芦科作物在浙江省和周边地区的栽培面积不断扩大,其栽培模式也呈现多样化趋势.凡是种植瓜类作物的地区都有病毒病的发生,但是,中国在该科作物的病毒病研究相对滞后.该研究对中国部分地区的葫芦科作物进行了病毒分离和鉴定,确定小西葫芦黄化花叶病毒(Zucchini yellow mosaic virus,ZYMV)和黄瓜花叶病毒(Cucumber mosaic virus,CMV)是侵染葫芦科植物的2种主要病毒病原,系统检测了浙江地区该科作物上的ZYMV和CMV的季节和寄主分布情况,并在分子水平上进行了病毒基因组变异规律和变异趋势的摸索和病毒致病性研究.

目录

致谢

缩语表

摘 要

ABSTRACT

第一章文献综述：葫芦科作物病毒研究进展

1.1植物病毒研究的发展概况

1.2病毒的基因组核酸研究

1.2.1植物病毒核酸组成

1.2.2植物病毒基因组结构和功能

1.3植物病毒研究的方法学

1.3.1寄主生物学方法

1.3.2细胞病理学方法

1.3.3血清学方法

1.3.4病毒dsRNA分析

1.3.5 PCR和RT-PCR技术

1.3.6核酸杂交方法

1.3.7基因芯片方法

1.3.8异源双链泳动分析法

1.4葫芦科植物的分布特征与作物生产现状

1.5葫芦科作物病毒及其研究进展

1.5.1葫芦科作物病毒病的发生

1.5.2侵染葫芦科作物的2种主要病毒

1.6植物病毒控制的理论与实践

1.6.1农业防治措施

1.6.2化学防治措施

1.6.3选育和利用抗病品种

1.6.4脱毒和繁育无病毒苗木

1.6.5交叉保护

1.6.6抗植物病毒基因工程

1.6.7强化植物检疫措施

1.7研究目的及内容

第二章2种葫芦科作物病毒的分离鉴定

2.1材料与方法

2.1.1毒源采集与保存

2.1.2寄主反应测定

2.1.3病毒dsRNA提取与分析

2.1.4病毒粒子部分提纯

2.1.5提取病毒的变性蛋白电泳(SDS-PAGE)

2.1.6病毒形态学与组织病变观察

2.2结果与分析

2.2.1寄主生物学检测结果

2.2.2病毒dsRNA分析结果

2.2.3提纯病毒SDS-PAGE分析结果

2.2.4电镜观察结果

2.3结论与讨论

第三章ZYMV 3＇末端序列的多态性研究

3.1材料与方法

3.1.1毒源与病毒分离

3.1.2酶与试剂

3.1.3 RNA模板制备

3.1.4引物设计

3.1.5 RT-PCR扩增

3.1.6试剂盒回收目的片段

3.1.7连接反应

3.1.8感受态细胞的制备和重组质粒的转化

3.1.9重组质粒的筛选

3.1.10碱法裂解提取质粒

3.1.11重组质粒的鉴定

3.1.12序列测定及分析

3.2结果与分析

3.2.1 3＇末端序列的RT-PCR结果

3.2.2重组质粒的筛选

3.2.3重组质粒的鉴定

3.2.4序列分析结果

3.3结论与讨论

第四章CMV CP基因序列多态性分析

4.1材料和方法

4.1.1病毒分离物

4.1.2酶与试剂

4.1.3 RNA模板制备

4.1.4引物设计

4.1.5 RT-PCR扩增

4.1.6 CP基因的克隆和重组克隆的筛选

4.1.7序列测定和分析

4.2结果与分析

4.2.1 RT-PCR结果

4.2.2重组质粒的筛选

4.2.3重组质粒的鉴定

4.2.4序列测定及分析

4.3结论与讨论

第五章2种葫芦科侵染病毒发生的生态学研究

5.1材料与方法

5.1.1病毒分离物与质粒保存

5.1.2样品采集

5.1.3试剂

5.1.4探针模板的制备

5.1.5植物总RNA的提取

5.1.6 RNA样品的变性与点膜

5.1.7杂交反应

5.1.8点杂交条件试验的建立

5.2结果与分析

5.2.1样品采集

5.2.2探针模板的制备

5.2.3点杂交条件试验结果

5.3结论与讨论

第六章2种葫芦科侵染病毒的致病性和品种抗性研究

6.1材料与方法

6.1.1致病性检测

6.1.2抗病性检测

6.2结果与分析

6.2.1致病性检测结果

6.2.2抗病性鉴定结果

6.3结论与讨论

总讨论

参考文献

附件1侵染葫芦科作物常见病毒的主要特征

附件2重要溶液的配制

附件3在读硕士期间的研究论文

附件4在读硕士期间申请的专利和鉴定的成果

附件5在读硕士期间获得的荣誉奖励