DNA聚合酶κ和DNA聚合酶η在烷化剂MNNG引起的非定标突变中的作用

摘要

目前对哺乳类动物细胞中非定标致突变情况的研究尚不多.我们和其它实验室已有的工作证明哺乳类细胞中也存在非定标突变.我们用携带靶基因supF tRNA的穿梭质粒pZ189转染在12-24小时前经低剂量烷化剂N-甲基-N'-硝基-N-亚硝基胍(MNNG)处理过的细胞并使之在其中复制.在回收的质粒中,我们检测到了延迟发生的、高于对照的突变.其中本实验室已经证实的发生非定标突变的聚合酶有Polβ、Polζ.该课题继续研究了Polκ、Polη与非定标突变的关系.1.建立Polκ和Polη表达阻断的细胞系.我们用反义RNA技术建立了Polκ表达下调的转基因细胞系.FL-Polκ<'->、FL-Polη<'->细胞中MNNG诱发的非定标性突变率下降.提示Polκ和Polη对细胞遗传稳定性的维持有重要作用.但在MNNG处理细胞后再转入pZ189质粒,在FL细胞MNNG诱发pZ189质粒,supF tRNA基因上的非定标性突变的突变频率为8.6×10<'-4>,在FL-M细胞为8.9×10<'-4>,而在FL-Polκ<'->和FL-Polη<'->细胞系中,MNNG皆不能诱发supFtRNA基因的非定标性突变,由此证明FL-Polκ、FL-Polη均参与了MNNG诱发的非定标突变.

目录

缩略语

前言

实验材料

基本实验操作

实验方法

结果

讨论

参考文献

附录

综述

致谢