选择性环氧合酶-2抑制剂在胆固醇结石形成中作用的研究

摘要

胆石症是一个世界性的常见病,高发病,其患者达人群的10﹪,严重危害着人们的身体健康.近年来,由于饮食习惯的改变,动物脂肪的摄入增加,国人胆石症中胆固醇结石所占的百分比有所升高,如何防治和治疗胆石症已成为人们关心的问题.对于胆结石的发病机理目前尚不十分清楚,除了关系密切的类脂质代谢异常和胆囊因素以外,胆结石的形成过程中还常常合并有慢性炎症的过程.众多实验表明COX-2抑制剂能产生与非甾体类抗炎药(nonsteriodal anti-inflammatory drugs, NSAIDs)药物相类似的抑制前列腺素合成的作用,但是它在NSAIDs作用的位置只产生抗炎和镇痛的作用,减少一系列的不良反应.NSAIDs可以减少胆固醇结石的形成,但其在抑制COX-2同时,也抑制了COX-1的活性,减少了COX-1诱导的PG合成,造成胃肠道的不良反应.选择性COX-2抑制剂减少了这些不良副反应,有着很大的应用前景.研究提示,COX-2参与了胆囊炎症反应,选择性COX-2抑制剂能阻止LPS等炎症因子刺激胆囊细胞PG的合成,有效地治疗胆囊疾病.关于选择性COX-2抑制剂在胆固醇结石形成过程中,能否通过影响炎症反应来抑制中减少结石形成的实验研究,尚未见国内外文献报道.材料和方法采用普通家兔30只(3~4月龄,雌雄不拘,体重2.2~2.9kg),随机等分为三组:空白组、成石组、实验组.以普通颗粒饮料喂养1周以后分组单笼饲养,空白组饲以普通颗粒饲料,成石组饲以1.2﹪高胆固醇饲料,实验组在1.2﹪高胆固醇饲料的基础上按10mg.kg<'-1>.d<'-1>加饲特异性COX-2抑制剂西乐葆.7周后,禁食12h致死后剖腹,分离胆囊胆管,于胆囊颈剖结扎后离断胆囊,收集胆汁观察成石结晶情况.将胆囊经生理盐水漂洗后,肉眼观察内部粘膜改变;沿肝面纵行剖开,同时纵行切取约2mm×2~4mm胆囊组织,固定于10﹪福尔马林液内待行病理检查和免疫组化.肉眼观察胆汁色泽、粘度及有无胆固醇结晶(直径>1mm,成形粗大的泥沙样颗粒)形成.胆囊标本经10﹪福尔马林固定,包埋切片经HE染色后,交浙江大学医学院病理教研室光镜下观察胆囊炎症情况,参照井冈山胃炎标准分极.胆囊组织石蜡切片脱蜡和水化后,按链霉素抗生素蛋白-过氧化酶免疫组化试剂盒说明规范操作,每张切片加1滴过氧化物酶阻断剂,室温孵育10min;生理盐水冲洗;加入非免疫动物血清,室温孵育5min;以0.2﹪牛血清白蛋白按1;1000稀释一抗(鼠抗兔COX-2多克隆抗体),室温过夜;生理盐水冲洗3min×5次;加入生物素标记的二抗室温孵育30min;生理盐水清洗,邻二茴香胺(AEC)显色剂显色1~2min;自来水冲洗后,苏木素复染15min;直接水性AEC封片剂封固.免疫组化染色结果COX-2阳性呈红色,阴性为蓝色.于浙江大学医学院形态中心以高清晰度彩色病理图文报告分析系统(HPIAS-1000)半定量测定COX-2表达阳性面密度.各组胆汁结晶情况以分数表示,行卡方检验;黏膜炎症分级参考井冈山胃炎标准,行等级秩和检验;黏膜上皮COX-2表达量数据采用阳性面密度值,以x±s<,x>表示,组间差异行方差分析q检验.数据处理均采用SPSS10.0软件包分析.结论1.在胆固醇结石形成过程中,胆囊粘膜上皮的炎症程度升高,COX-2表达亦明显升高.2.选择性COX-2抑制剂可以减轻胆囊上皮炎症程度,抑制COX-2表达3.选择性COX-2抑制剂可能通过抑制炎症过程来减少炎症反应,从而降低胆固醇结石形成的机会.

目录

前言

材料与方法

结果

讨论

结论

参考文献

综述一

参考文献

综述二

参考文献

致谢