细胞粘附调节基因CARmRNA在肝癌细胞系中的表达及苦参碱体外诱导肝癌分化的实验研究

摘要

第一部分细胞粘附调节基因CARmRNA在人肝癌细胞系中的表达.该研究通过RT-PCR技术,首次明确了细胞粘附调节基因(CAR)在几种常见人肝癌细胞系中mRNA的表达情况,为进一步研究该基因的作用机制提供理论基础.结论1.正常成人肝细胞系CARmRNA正常表达,而人肝癌细胞系CARmRNA表达均减弱,提示人肝癌细胞系中细胞粘附调节基因在转录水平受到抑制.2.3种不同人肝癌细胞系之间CARmRNA表达存在差异,按表达强弱顺序依次为SMMC-7721>HepG2>Bel-7404.第二部分:苦参碱体外诱导肝癌分化的实验研究.该研究以人肝癌细胞系Bel-7404为实验对象,以苦参碱为诱导分化剂,观察不同浓度的药物体外作用于肝癌细胞时,对肿瘤细胞生长增殖相关指标和侵袭转移相关指标的影响,重点研究苦参碱作为诱导分化剂时对肿瘤细胞侵袭转移能力的抑制作用.结论1.0.5~1.0g/L是苦参碱诱导肿瘤细胞分化的合适浓度.2.0.5~1.0g/L浓度范围内的苦参碱对人肝癌细胞系Bel-7404具有诱导分化作用,能显著降低其侵袭转移能力.第三部分:苦参碱体外诱导肝癌分化的机制探讨.随着近年来肿瘤诱导分化疗法的兴起,关于苦参碱诱导多种恶性肿瘤细胞分化的研究报道日益增多.但多数报道局限于诱导分化指标的检测,对于苦参碱诱导分化的具体作用机制研究很少.目前,苦参碱诱导分化的作用机制尚不清楚,仅有极少数研究表明可能和细胞信号转导有关.新近发现的细胞粘附调节基因CAR恰巧被认为是一个信号转导分子,且功能与细胞粘附密切相关.而在肿瘤的侵袭转移过程中,癌细胞的粘附和去粘附是第一步,也是贯穿整个浸润转移过程的重要步骤.因此,根据其结构和功能分析,细胞粘附调节基因CAR很可能在苦参碱诱导分化过程中发挥重要作用.细胞周期调节机制异常,尤其是G1期调节机制异常在肝癌发生发展过程中起着重要的作用.而通过改变细胞周期来影响肿瘤细胞增殖及分化是许多临床常用抗癌药物的作用方式.近年来,随着对中医药研究的逐步深入,国内学者纷纷发现多种中药的抗肿瘤作用也与细胞周期改变有关.该研究拟采用RT-PCR技术研究不同浓度苦参碱对细胞粘附调节基因CARmRNA表达的影响,同时以流式细胞术检测肝癌细胞周期的变化,进而初步探讨苦参碱诱导肝癌分化的作用机制.材料和方法用0.5g/L、0.75g/L、1.0g/L苦参碱分别处理人肝癌细胞系Bel-740472小时.取各组细胞行半定量RT-PCR,以评价不同浓度苦参碱对细胞粘附调节基因CARmRNA表达的影响.取各组细胞以流式细胞仪检测细胞周期的变化,以评价不同浓度苦参碱对肝癌细胞周期的影响.结果RT-PCR结果显示,0.5g/L、0.75g/L、1.0g/L三个浓度苦参碱可不同程度地增加CARmRNA的表达量,且表达量随着苦参碱浓度的增加而增加.流式细胞仪检测显示,随着苦参碱浓度的逐渐增加,G1期细胞逐渐增多,G2和S期细胞显著降低.提示苦参碱可抑制肿瘤细胞进入S期,从而使细胞在G1期堆积.结论1.0.5~1.0g/L苦参碱可上调细胞粘附调节基因CARmRNA在人肝癌细胞系Bel-7404中的表达.2.通过上调细胞粘附调节基因CARmRNA表达,进而影响细胞信号转导通路,最终降低肿瘤细胞的侵袭转移能力可能是苦参碱诱导分化的重要机制.3.对肿瘤细胞周期变化的影响也是苦参碱诱导分化的可能机制之一.

目录

研究背景

材料和方法

结果

讨论

结论

参考文献

第二部分苦参碱体外诱导肝癌分化的实验研究

研究背景

材料和方法

结果

讨论

结论

参考文献

第三部分苦参碱体外诱导肝癌分化的机制探讨

研究背景

材料和方法

结果

讨论

结论

参考文献

综述一

综述二

附录一：在读期间发表和待发表的论文目录

附录二：在读期间参与的科研项目

附录三：在读期间获奖情况

致谢