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中国水仙遗传转化及离体诱变体系的研究

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摘要

前言

1文献综述

1.1中国水仙发展现状

1.1.1中国水仙概况

1.1.2生产现状

1.1.3中国水仙种质资源以及品种改良研究现状

1.1.4中国水仙育种发展趋势

1.2中国水仙组织培养及其转基因研究进展

1.2.1中国水仙组织培养

1.2.2中国水仙转基因研究进展

1.3花卉—花型、花色基因工程研究进展

1.3.1花色改良

1.3.2花型改良

1.3.3花卉基因工程前景展望

1.4花卉辐射诱变育种研究进展

1.4.1花卉主要育种手段

1.4.2辐射诱变方法与技术的发展

1.4.3辐射诱变机理的研究

1.4.4花卉辐射诱变育种展望

2中国水仙再生体系的构建及不定芽发生的细胞学观察

2.1材料与方法

2.1.1试验材料

2.1.2试验方法

2.2结果与分析

2.2.1不同消毒方式对外植体污染率和丛生芽分化的影响

2.2.2不同外植体、激素配比对愈伤组织诱导以及再分化的影响

2.2.3不同激素配比对带鳞片叶的鳞茎盘直接诱导丛生芽的影响

2.2.4不同生理状态对鳞茎盘丛生芽直接诱导的影响

2.2.5影响试管小鳞茎芽增殖能力主要影响因子研究

2.2.6PP333对试管小鳞茎膨大和生长的影响

2.2.7不同生根诱导培养基和移栽方式对试管苗的影响

2.2.8带鳞片叶鳞茎盘上不定芽发生的细胞学观察

2.3讨论

2.3.1热水处理对外植体消毒和丛生芽分化的影响

2.3.2中国水仙胚性愈伤组织的获得

2.3.3不定芽发生过程中细胞学观察的意义

2.3.4PP333对鳞茎形成的促进作用

3中国水仙鳞茎离体芽发生过程生理生化代谢的变化

3.1材料与方法

3.1.1不同生理年龄和冷处理鳞茎不同部位碳水化合物含量的测定

3.1.2抗氧化酶活力和可溶性蛋白含量测定

3.1.3溶性蛋白的SDS-PAGE凝胶电泳分析

3.2结果与分析

3.2.1生理年龄和冷处理对鳞茎盘和鳞片叶中生理生化变化的影响

3.2.2鳞茎盘不定芽分化过程中的生理生化变化

3.3讨论

3.3.1中国水仙外植体的生理状态对其离体再生的影响

3.3.2外植体离体再生过程中的生理生化变化

3.3.3辐射诱变和遗传转化中合理处理时期的选择

4中国水仙遗传转化体系的构建

4.1材料与方法

4.1.1材料

4.1.2试验方法

4.2结果与分析

4.2.1卡那霉素对离体鳞茎盘生长与分化的影响

4.2.2潮霉素对离体鳞茎盘生长与分化的影响

4.2.3三种抑菌抗生素对农杆菌抑制效果的影响

4.2.4三种抗生素对鳞茎盘丛生芽发生的影响

4.2.5不同感染和共培养方式对农杆菌转化鳞茎盘的影响

4.2.6转化体的X-Gluc组织化学染色检测

4.3讨论

5中国水仙离体诱变体系的构建

5.1材料与方法

5.1.1三种辐射处理材料的准备和辐照处理

5.1.2辐照处理材料可溶性蛋白的SDS-PAGE分析

5.1.3辐射后水仙鳞茎叶片基因组的RAPD分析

5.2结果与分析

5.2.1不同辐射剂量对处于不同分化时期的鳞茎盘不定芽分化的影响

5.2.2不同辐射剂量对试管小鳞茎成活率的影响

5.2.3不同辐射剂量对接种7 d的鳞茎盘不定芽分化的影响

5.2.4可溶性蛋白含量变化和SDS-PAGE分析

5.2.5不同剂量的辐照处理对接种7 d的鳞茎盘抗氧化系统的影响

5.2.6辐射小鳞茎叶片可溶性蛋白的SDS-PAGE凝胶电泳分析

5.2.7辐射小鳞茎叶片的RAPD-PCR分析

5.3讨论

小结与结论

参考文献

附图

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摘要

本文对中国水仙遗传转化及离体诱变体系进行研究,以中国水仙为材料,在建立高效再生体系的基础上,初步建立了中国水仙的遗传转化体系和离体辐射诱变体系,为建立水仙品种改良技术体系提供研究基础。研究结果如下:1.冷处理不仅可以提高鳞茎盘的分化率,而且缩短了分化所需时间。2.冷处理降低了水仙鳞茎的总糖、蔗糖以及淀粉含量,还原糖和可溶性蛋白含量显著升高,POD、CAT活性也显著升高。3.探讨了5种抗生素对中国水仙离体培养反应的影响;用转化pBI 1301空载体的农杆菌转化预培养7d的带鳞片叶的鳞茎盘,建立了较完善的中国水仙的遗传转化体系。4.接种7 d的鳞茎盘最适合作为水仙离体诱变的材料。

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