烟草曲茎病毒复制相关蛋白基因原核表达条件优化及核酸结合特性的初步研究

摘要

双生病毒是一类世界范围内广泛发生的单链环状DNA病毒，主要以滚环复制的方式进行病毒基因组的复制。与此类病毒致病性紧密相关的新型卫星分子DNAβ依赖病毒DNA-A进行复制。为了进一步了解DNAβ复制的机制，本论文对烟草曲茎病毒(Tobacoocurlyshootvirus，TbCSV)的复制相关蛋白基因(replication-associatedprotein，Rep)进行了原核表达，并对Rep的核酸结合特性进行了初步研究。 为了提高TbCSVRep在大肠杆菌(Escherichiacoli)中表达量，我们研究了大肠杆菌菌株、温度、诱导时间以及诱导剂IPTG终浓度等不同条件对GST-Rep融合蛋白表达量的影响。结果表明，大肠杆菌菌株Rosetta在37℃培养3hr后，使用终浓度为0.5mmol/L的IPTG在28℃诱导培养4hr时，GST-Rep融合蛋白表达量最高，表达的GST-Rep融合蛋白可占细菌总蛋白的42％。用GST-Sepharose4B亲和层析柱对GST-Rep融合蛋白进行纯化，SDS-PAGE表明GST-Rep融合蛋白大小约为66kDa，与预计的分子量大小一致，Westernblot分析表明其能与GST多克隆抗体起特异性反应。Rep基因的优化表达为研究该基因的作用机理打下基础。 双生病毒编码的Rep具有结合核酸的能力。为了验证Rep能否结合DNAβ，我们利用TbCSV-Y35Rep蛋白进行了核酸结合试验。以全长TbCSV-Y35DNAβ分子作为探针，结果表明TbCSV-Y35Rep蛋白能结合单、双链DNAβ。

目录

文摘

英文文摘

致谢

第一章文献综述

第二章材料与方法

第三章烟草曲茎病毒复制相关蛋白基因原核表达条件优化研究

第四章烟草曲茎病毒复制相关蛋白结合DNAβ特性的初步研究

全文小结

参考文献

附录