吲哚黄杆菌和粘金黄杆菌耐药性及粘金黄杆菌耐药机制的研究

摘要

目的:首先探讨产吲哚黄杆菌(简称吲哚黄杆菌)和粘金黄杆菌β-内酰胺酶的检出情况，主要包括超广谱β-内酰胺酶和金属β-内酰胺酶；其次是探讨β-内酰胺酶阴性菌株和阳性菌株耐药性的区别；再次，探讨吲哚黄杆菌和粘金黄杆菌多重耐药的机制；最后，研究粘金黄杆菌对亚胺培南耐药的机制，主要包括β-内酰胺酶的作用，外膜蛋白的作用和外排机制的作用，并指导临床合理用药。 方法:收集了本院的25株吲哚黄杆菌和10株粘金黄杆菌。首先用琼脂稀释法测定15种药物的最小抑菌浓度；其次用三维试验测定超广谱β-内酰胺酶和金属β-内酰胺酶，并使用三对引物扩增特异性基因;最后，按照NCCLS的方法，分析了β-内酰胺酶阳性菌株和阴性菌株耐药性的差异。 临床粘金黄杆菌676和592对亚胺培南敏感(MIC≤4ug/ml)，使用它做诱导试验。经过在含有亚胺培南浓度递增的培养基上连续传代后，得到了两株对亚胺培南耐药的菌株，命名为676imp-r和592imp-r。然后按照测定四株细菌的MIC和β-内酰胺酶情况。 用离心的方法收集外膜蛋白，聚丙烯酰胺凝胶电泳的方法分析比较外膜条带的差异。 用CCCP和利血平抑制的方法验证泵出机制，CCCP为0.5ug/ml，利血平为10ug/ml。在抑制剂存在的条件下，亚胺培南的MIC下降为原来的1/4时表明存在泵出机制。 结果: 1.25株吲哚黄杆菌中，金属酶β-内酰胺酶的检出率为72.0％(18/25)；10株粘金黄杆菌，金属酶的检出率为90％(9/10)。所有菌株中，都没有检出超广谱β-内酰胺酶。PCR扩增试验表明，IND基因的检出率为20％(5/25)，CGB基因的检出百分率为30％(3/10)，CGA的检出率为0。 2.吲哚黄杆菌对IMP，AMC，CTX，CRO，CFP，CAZ，ATM和FEP的耐药率都超过了50％；TZP，TIM，SCF，LEV和CIP的耐药率分别为18.5％，33.3％，8.3％，27.8％和33.3％。IMP，AMC，TIM，CTX，SCF，CRO，CAZ，ATM和FEP对粘金黄杆菌的耐药率都超过了50％，TZP，CFP，LEV和CIP的耐药率分别为46.8％，30.0％，44.1％，44.2％。 3.吲哚黄杆菌金属酶阳性菌株和金属酶阴性菌株耐药相比较，IMP，TZP，AMC，TIM，CTX，CRO，CFP，CAZ有显著性差异，P＜0.05，说明这些药物的耐药与金属酶的关系密切；而ATM，FEP，LEV和CIP没有显著性差异，说明吲哚黄杆菌对这些药物的耐药与金属酶关系不大。 4.连续传代40次后，获得了2株耐药株：676ipm-r和592imp-r，对亚胺培南的MIC均为64ug/ml。原始菌株和诱导菌株对TZP，AMC，TIM，CTX，SCF，CRO，CFP，CAZ，FOX，AZT，LEV，VA，FEP和CIP的耐药谱没有明显变化。 5.四株细菌都检测到CGB基因；在12.0％的分离胶中，诱导前和诱导后的菌株电泳条带看不出明显的差异；CCCP和利血平存在的条件下，相关菌株的MIC变化很小，没有下降到原来的1/4。 结论： 1.吲哚黄杆菌和粘金黄杆菌ESBLs的检出率很底，而金属酶的检出率很高。 2.吲哚黄杆菌和粘金黄杆菌对碳青霉烯类，青霉素类和部分头孢类耐药。而喹诺酮类(LEV，CIP)和含有β-内酰胺酶抑制剂的哌拉西林可以做为治疗吲哚黄杆菌和粘金黄杆菌感染的首选药。 3.金属β-内酰胺酶可能是造成吲哚黄杆菌和粘金黄杆菌多重耐药的主要原因。 4.没有证据证明泵出机制和外膜蛋白在粘金黄杆菌对亚胺培南的耐药中起作用，但金属β-内酰胺酶与其耐药的关系密切。

目录

文摘

英文文摘

第1章吲哚黄杆菌和粘金黄杆菌耐药性的研究

第2章粘金黄杆菌对亚胺培南耐药机制的研究

第3章革兰氏阴性菌对碳青霉烯类抗生素耐药机制研究的进展

附录1英文缩略词表

附录2研究生期间发表的论文

致谢