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第一章文献综述
1.1代谢工程
1.2细胞代谢调控的研究方法及系统生物学
1.3 大肠杆菌的中心代谢途径调控机理研究
1.4突变大肠杆菌的相关研究
1.5本研究中突变大肠杆菌的构建
1.6研究思路及目标
参考文献
第二章lpdA基因敲除对Escherichia coli生长代谢的影响
2.1引言
2.2材料与方法
2.2.1菌株
2.2.2试剂
2.2.3仪器
2.2.4培养方法
2.2.5细胞浓度测定
2.2.6 CO2和O2浓度测定
2.2.7底物及一些胞外代谢产物浓度的测量
2.2.8蛋白质浓度测量
2.2.9酶活的测量
2.2.10胞内代谢物浓度的测量
2.3结果与讨论
2.3.1 E.coli lpdA-在添加葡萄糖的LB培养基中的有氧发酵
2.3.2 E.coli lpdA-在添加丙酮酸或乙酸的LB培养基中的有氧发酵
2.3.3 E.coli lpdA-的微氧发酵
2.3.4 E.coli lpdA-的连续发酵
2.4本章小结
参考文献
第三章poxB基因敲除对Escherichia coli生长代谢的影响
3.1引言
3.2材料与方法
3.2.1菌株
3.2.2试剂
3.2.3仪器
3.2.4培养方法
3.2.5细胞浓度测定
3.2.6 CO2和O2浓度测定
3.2.7底物及一些胞外代谢产物浓度的测量
3.2.8蛋白质浓度测量
3.2.9酶活的测量
3.2.10酶活结果的统计学分析
3.3结果与讨论
3.3.1 poxB基因敲除对E.coli细胞生长特性的影响
3.3.2 poxB基因敲除对E.coli酶活的影响
3.4本章小结
参考文献
第四章sucA基因敲除对Escherichia coli生长代谢的影响
4.1引言
4.2材料与方法
4.2.1菌株
4.2.2试剂
4.2.3仪器
4.2.4培养方法
4.2.5细胞浓度测定
4.2.6 CO2和O2浓度测定
4.2.7底物及一些胞外代谢产物浓度的测量
4.2.8蛋白质浓度测量
4.2.9酶活的测量
4.2.10胞内代谢物浓度的测量
4.2.11利用RT-PCR考察基因转录水平
4.3结果与讨论
4.3.1分批发酵中sucA基因敲除对E.coli细胞生长的影响
4.3.2分批发酵中sucA基因敲除对E.coli酶活的影响
4.3.3分批发酵中sucA基因敲除对E.coli胞内代谢物浓度的影响
4.3.4连续发酵中sucA基因敲除对E.coli细胞生长的影响
4.3.5连续发酵中sucA基因敲除对E.coli酶活的影响
4.3.6连续发酵中sucA基因敲除对E.coli胞内代谢物浓度的影响
4.3.7连续发酵中sucA基因敲除对E.coli基因表达的影响
4.3.8讨论
4.4本章小结
参考文献
第五章sucC基因敲除对Escherichia coli生长代谢的影响
5.1引言
5.2材料与方法
5.2.1菌株
5.2.2试剂
5.2.3仪器
5.2.4培养方法
5.2.5细胞浓度测定
5.2.6 CO2和O2浓度测定
5.2.7底物及一些胞外代谢产物浓度的测量
5.2.8蛋白质浓度测量
5.2.9酶活的测量
5.2.10胞内代谢产物浓度的测量
5.2.11利用RT-PCR考察基因转录水平
5.3结果与讨论
5.3.1分批发酵中sucC基因敲除对E.coli细胞生长的影响
5.3.2分批发酵中sucC基因敲除对E.coli酶活的影响
5.3.3分批发酵中sucC基因敲除对E.coli胞内代谢物浓度的影响
5.3.4连续发酵中sucC基因敲除对E.coli细胞生长的影响
5.3.5连续发酵中sucC基因敲除对E.coli酶活的影响
5.3.6连续发酵中sucC基因敲除对E.coli胞内代谢物浓度的影响
5.3.7连续发酵中sucC基因敲除对E.coli基因表达的影响
5.3.8 讨论
5.4本章小结
参考文献
第六章单基因敲除对Escherichia coli生长代谢的影响
6.1引言
6.2糖酵解途径酶基因敲除对E.coli生长代谢的影响
6.3糖酵解途径与三羧酸循环连接酶基因敲除对E.coli生长代谢的影响
6.4三羧酸循环酶基因敲除对E.coli生长代谢的影响
6.5氧化磷酸戊糖途径酶基因敲除对E.coli生长代谢的影响
6.6回补途径酶基因敲除对E.coli生长代谢的影响
6.7本章小结
参考文献
第七章代谢通量分布的计算方法及在实际体系中的应用
7.1引言
7.2材料与方法
7.2.1菌种
7.2.2试剂
7.2.3仪器
7.2.4培养方法
7.2.5样品制备及测量分析方法
7.2.6反应网络的构建
7.2.7代谢通量分布(metabolic flux distribution,MFD)的计算方法
7.3结果与讨论
7.3.11H-13C NMR谱图结果(以lpdA突变菌的实验谱图为例说明)
7.3.2气/质联用谱图结果(以lpdA突变菌的实验谱图为例说明)
7.3.3lpdA基因敲除大肠杆菌的代谢通量
7.3.4 sucA基因敲除大肠杆菌的代谢通量
7.4本章小结
参考文献
第八章结论与展望
8.1糖酵解和三羧酸循环连接酶基因lpdA或poxB的敲除对大肠杆菌代谢的影响
8.2三羧酸循环酶基因sucA或sucC的敲除对大肠杆菌代谢的影响
8.3基于13C标记实验的代谢通量分析
8.4展望与建议
附录
相关酶的名称对照
相关代谢物的名称对照
氨基酸的名称对照
致谢
攻读博士学位期间论文发表情况
浙江大学;