红豆杉内生真菌F0986发酵条件优化及其次生代谢产物的研究

摘要

植物内生真菌(Endophytic fungi)是指在某一时期生活在之物体内，但对寄主植物组织并不引起明显病害症状的真菌。由于长期生长在植物内部，往往能产生许多具有与共生植物相似的活性代谢产物。植物内生真菌作为一种新的微生物资源引起了人们广泛的关注，从内生真菌中寻找和发现新的活性物质，如抗肿瘤、抗真菌等活性化合物是植物内生真菌研究的一个热点。 本文主要以南方红豆杉内生真菌紫杉木霉(Trichoderma taxi sp.nov.`)F0986为研究对象，对其发酵条件进行优化，另外对其次生代谢产物进行了分离纯化、结构鉴定、毒性试验、抑菌活性试验和化合物稳定性的研究。 主要研究结果如下： 1、以对F0986菌株具有较好发酵效价的MID培养基为基础，应用均匀设计方案对10个培养基组分进行考察，初步确定了N15培养基作为F0986菌株的最佳发酵培养基。同时对初始pH值对生物量和发酵效价的影响也做了考察，发酵液在初始pH值为5-6之间时抑菌活性最高。 2、应用层析方法对F0986发酵液成分进行了分离纯化，应用活性跟踪和化学结构的鉴定方法，确定主要活性组分木霉菌酯素。建立了木霉菌酯素分析方法。 3、应用本实验室发明的化合物细胞毒检测方法和大鼠急性经口毒性试验对F0986菌株主要代谢产物进行了初步的细胞毒活性测定，木霉菌酯素属中毒级。 4、木霉菌酯素对温度、pH的稳定性试验表明，该化合物在80℃以下都很稳定；该化合物在酸性和中性条件下都很稳定，但在碱性条件下比较容易分解。

目录

文摘

英文文摘

致谢

第一章综述

1.植物内生真菌的研究进展

1.1植物内生真菌的涵义及研究历史

1.2内生真菌在植物类群里的分布规律

1.3内生真菌在植物体里的分布规律

1.4生物多样性

1.5植物内生真菌的专一性

1.6植物内生真菌的生物学及生态学意义

1.7植物内生真菌的活性代谢产物

2.红豆杉内生真菌的研究情况

2.1国外红豆杉内生真菌的研究现状

2.2国内红豆杉内生真菌的研究现状

3.本论文的研究意义及内容

第二章F0986发酵条件的优化

1. F0986简介

2.F0986发酵条件的初步研究

2.1材料和方法

2.2实验结果

2.3讨论

第三章F0986次生代谢产物的研究

1.仪器和材料

1.1 F0986发酵液

1.2发酵液预处理

1.3样品精制

1.4抑菌试验

1.5细胞毒性实验

2.方法

2.1发酵液的预处理

2.2硅胶柱分离

2.3高效液相色谱(HPLC)分析与制备

2.4抑菌试验

2.5细胞毒性试验

2.6木霉菌酯素对温度和pH稳定性的试验

3.结果

3.1萃取用有机相选择

3.2分离纯化

3.3木霉菌酯素样品分析

3.4高效液相色谱制备柱分离

3.5细胞毒性分析

3.6木霉菌酯素对温度和pH的稳定性试验结果

4.讨论

参考文献

附录