ESAT-6/CFP-10融合蛋白的抗原性分析及其对诊断结核的临床应用价值

摘要

目的：分析ESAT-6/CFP-10融合蛋白作为结核抗原的特性，并探讨以其作为抗原的酶联免疫斑点实验(ELISPOT)在结核诊断中的应用价值。 方法：利用ELISPOT对ESAT-6/CFP-10融合蛋白与PPD作比较，分析ESAT-6/CFP-10融合蛋白作为结核特异性抗原的特性与优势；并通过以ESAT-6/CFP-10融合蛋白为刺激抗原的ELISPOT法(ESAT-6/CFP-10—ELISPOT)检测经结核特异性抗原刺激后分泌γ干扰素的效应T淋巴细胞数量方法，测定65例单纯结核病患者，16例HIV/结核双重感染患者，20例HIV感染患者，32例非结核呼吸道疾病患者，30名健康体检者外周血单个核细胞中结核菌抗原特异的T淋巴细胞的频率。并与传统结核诊断方法进行比较。 结果：ESAT-6/CFP-10融合蛋白与PPD在结核患者中抗原作用相同，但是PPD在正常BCG接种人群中会出现假阳性，而融合蛋白仍为阴性。ESAT-6/CFP-10—ELISPOT与TST(PPD皮试)在所有81例结核患者中的比较，ESAT-6/CFP-10—ELISPOT阳性率98.8％，TST阳性率为56.8％，差异有统计学意义；ESAT-6/CFP-10—ELISPOT在涂阳结核组、涂阴结核组(肺外结核)、HIV/结核双重感染组阳性率分别为100％、97.1％、100％，其敏感性远高于痰涂片检查，且各组结果差异无统计学差异。对照组中20例HIV感染组有1例阳性，非结核呼吸道疾病患者组与健康对照组均为阴性，提示ESAT-6/CFP-10—ELISPOT方法的特异度为98.8％。 结论： 1、ESAT-6/CFP-10融合蛋白与PPD、单一抗原相比，具备更高的敏感性与特异性且不受BCG接种干扰等优势。提示融合蛋白更适合作为结核诊断中的特异性抗原。 2、ESAT-6/CFP-10—ELISPOT比传统结核诊断方法更灵敏、特异、快速。 3、ESAT-6/CFP-10—ELISPOT对各种类型的结核均有高敏感和高特异性，尤其为以往诊断困难的SNPT、肺外结核、HIV与TB双重感染患者及与其他呼吸系统疾病的鉴别提供了快速、确切诊断的可能。对结核潜伏感染(LTBI)比TST(PPD皮试)更敏感和快速，提示可替代TST对结核进行早期诊断。 4．ESAT-6/CFP-10—ELISPOT的结果判定标准仅以一个界定值作为划分是否感染的指标，斑点具体数目多少的意义仍未知。

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