复合OP-1多肽水凝胶缓释系统对小鼠成骨细胞ALP、OC和Cbfα1表达影响的实验研究

摘要

目的：本实验通过观察OP-1和复合OP-1多肽水凝胶缓释系统对小鼠成骨细胞(MC3T3-E1) ALP、OC和Cbfal蛋白表达的影响，探讨OP-1对成骨细胞分化的促进作用和复合OP-1多肽水凝胶缓释系统缓慢释放OP-1并促进成骨细胞分化的作用及可能机制，为进一步研究复合OP-1多肽水凝胶缓释系统提供实验依据。
　　 方法：实验分为3组，即OP-1组、OP-1/水凝胶组和对照组.无菌圆玻片平铺于无菌24孔培养板底，将传代后的MC3T3-E1以细胞密度5×104个/ml接种在各组圆玻片上，每孔培养液均为200μl，置37℃、5％ CO2、95％湿度培养箱中培养。其中OP-1/水凝胶组在接种细胞前每孔圆玻片周边涂布25μl OP-1多肽水凝胶缓释系统(25μl RADA16包封50 ng thOP-1)；OP-1组在细胞接种后吸去等体积培养液加入50ng thOP-1；对照组则不采用任何措施。在1d、4d、7d、10 d、14 d各时间点，吸去培养板中培养液，轻轻取出细胞爬片，立即用免疫细胞化学方法检测各组细胞ALP、OC和Cbfal的表达。应用Motic Med6.0数码医学图像分析系统进行图像分析，获得平均灰度值(最黑的灰度值为O，最白的灰度值为255，灰度值越小，阳性表达越多)。应用SPSS16.0统计学软件，采用单因素方差分析对实验结果进行统计学分析，P<0.05有统计学意义。
　　 结果：⑴免疫细胞化学染色结果显示，ALP、OC和Cbfal阳性着色主要位于细胞质内，表现为细胞质内棕黄色颗粒。⑵OP-1组细胞培养1d细胞质内ALP、OC无阳性表达，而Cbfal有阳性表达，与对照组比较有显著性差异(P<0.05)，表达量略多于对照组.培养4 d、7d、10d、14 d，细胞质内ALP、OC、Cbfal均有阳性表达，表达量均明显多于对照组(p<0.05)。培养7d，ALP、Cbfal表达量达高峰，而OC在10d表达量达高峰。⑶OP-1/水凝胶组细胞培养1d细胞质内ALP、OC均无阳性表达，而Cbfal有阳性表达，但与对照组比较无显著性差异(P>0.05).培养4 d、7d、10 d，14 d，ALP、OC、Cbfal均有阳性表达，表达量均明显多于对照组(P<0.05).培养4d、7 d、10 d，ALP表达量均少于OP-1组(P<0.05)，培养14 d与OP-1组比较无显著性差异(P>0.05)。培养4 d、7d、10 d、14 d，OC表达量均少于OP-1组(P<0.05)。培养1 d、4d、7d、10d， Cbfal表达量均少于OP-1组(P<0.05)，14 d与OP-1组比较无显著性差异(P>0.05).培养10d ALP、OC，Cbfal表达量均达高峰。
　　 结论：①OP-1能促进成骨细胞分化，增加ALP、OC和Cbfal的表达。②复合OP-1多肽水凝胶缓释系统能促进成骨细胞分化，增加ALP、OC和Cbfal的表达。③复合OP-1多肽水凝胶缓释系统使成骨细胞ALP和Cbfal的表达高峰推迟，可能具有缓释效果。

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1 材料与方法

2 结果

3 讨论

4 结论

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综述 生长因子及其控释系统在牵张成骨中的应用

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