牙龈卟啉单胞菌牙龈素促凝血功能域HGP44的基因克隆重组和表达

摘要

革兰氏阴性厌氧菌牙龈卟啉单胞菌（Porphyromonas gingivalis，P.g）是公认的主要的牙周可疑致病菌。牙龈素是牙龈卟啉单胞菌分泌的胞外蛋白酶，是其重要的毒力因子。与牙周病密切相关的牙龈素包括两种，精氨酸特异性蛋白酶（Arginine-gingipains，Rgps）和赖氨酸特异性蛋白酶（Lysine-gingipain，Kgp）。其中Rgps又称卟啉素，分为RgpA和RgpB两种。RgpA和Kgp均为非共价复合物，包一个N-末端前肽区，蛋白水解区和一个C-末端粘附素区（HGP15[HbR]，HGP17，HGP27和HGP44），具有独立的催化区域和凝集区域。HGP44是两种牙龈素上共有的一段粘附素区域，HGP44能够通过粘附到HIV-1 gp120蛋白上，阻断HIV-1外膜介导的膜融合，进一步阻断HIV感染。同时，P.g诱导的血小板聚集依赖细胞内编码HGP44粘附素的基因Hgp44。
　　 本研究的目的是克隆表达P.g蛋白酶的粘附素编码基因Hgp44，用于Hgp44的单克隆及多克隆抗体的制备，为进一步研究Hgp44的致病性及P.g促进血小板聚集的具体机制，以及明确牙周病与冠心病之间的关系垫定基础。
　　 方法：
　　 本文通过PCR方法扩增得到P.g ATCC33277的Hgp44基因，T-A克隆连接到pMD18-T载体，酶切连接到pET22b表达载体上，转化到BL21（DE3）中，构建Hgp44-pET22b-BL21（DE3）重组菌。IPTG诱导重组菌表达蛋白，SDS-PAGE初步鉴定。
　　 结果：
　　 扩增出目的片段Hgp44，与GenBank中等位基因序列比对，其同源性达95％；克隆重组后转化受体菌，成功诱导该重组菌表达目的蛋白HGP44。
　　 结论：
　　 成功构建Hgp44-pET22b-BL21（DE3）重组菌并诱导该重组菌表达目的蛋白HGP44，为继续研究HGP44的特性及其促进血小板聚集的具体机制垫定基础。