鸡白痢沙门氏菌部分基因的必需性鉴定

摘要

鸡白痢和鼠伤寒沙门氏菌均为沙门氏菌属成员，但二者有着明显的宿主嗜性和致病性差异，前者为仅感染鸡的专嗜性沙门氏菌，致死率高，对养禽业的危害极大;而后者可感染人和多种动物，是重要的人畜共患病原。目前对广嗜性沙门氏菌的研究较为广泛和深入，但对专嗜性的鸡白痢沙门氏菌研究相对较少。本实验对照鼠伤寒沙门氏菌的110个必需基因，运用插入复制突变法(IDM)的方法对鸡白痢沙门氏菌中的对应基因的必需性进行了初步的鉴定在KnuthK等鉴定出的257个鼠伤寒沙门氏菌必需基因中，除去本实验室林蕾已鉴定完成的109个及部分有关rRNA、tRNA功能的必需基因，我们从余下基因中选取110个作为本研究的目的基因。从NCBI上获取目的基因序列并设计引物，以鸡白痢沙门氏菌基因组为模板进行PCR扩增，扩增片段的大小集中在300-700bp间。将目的片段分别克隆入pIDM-T质粒后转化大肠杆菌TG1感受态细胞。经PCR和双酶切方法鉴定阳性克隆，抽提阳性质粒并电转化鸡白痢沙门氏菌CVCC527菌株，经鉴定成功获得110个含目的基因片段的鸡白痢沙门氏菌本菌株克隆。将阳性克隆分别于30℃增菌后稀释涂板，计数同样菌液量在37℃条件下长出的重组子数和30℃条件下长出的菌落总数，并计算IPC值。根据IPC值的大小对目的基因的必需性作初步鉴定。本实验初步鉴定的结果为:45个为鸡白痢沙门氏菌的必需基因，41个为疑似必需基因，24个为非必需基因。
　　 本实验运用IDM方法初步鉴定出了部分鸡白痢沙门氏菌必需基因，为鸡白痢沙门氏菌的分子生物学研究奠定了一定的基础。同时获得的24个鸡白痢和鼠伤寒沙门氏菌的差异基因可为二者的宿主差异研究提供参考。

目录

声明

摘要

第一部分 文献综述

1 沙门氏菌概论

1．1 沙门氏菌的分类

1．2 沙门氏菌的致病性研究

2 鸡白痢沙门氏菌

2．1 鸡白痢沙门氏菌生物学特性

2．2 鸡白痢沙门氏菌分子流行病概况

2．4 鸡白痢沙门氏菌的基因研究现状

3 必需基因

3．1 必需基因的概念

3．2 必需基因的研究进展

第二部 分研究内容

第一章 目的基因的温敏质粒克隆、鉴定及转化鸡白痢沙门氏菌本菌株

前言

1．材料

2．方法

3．结果

4．讨论

第二章 pIDM-T质粒复制温敏特性的测定及重组菌插入位点的鉴定

前言

1．材料

2 方法

3 结果

4 讨论

第三章 目的基因在鸡白痢沙门氏菌中的必需性鉴定

前言

1．材料

2．方法

3．结果

4．讨论

本研究创新点

参考文献

附录一 目的基因片段扩增引物序列

附录二 重组率(IPC)及在必需性鉴定结果

附录三 实验仪器及设备

致谢