木霉菌对辣椒疫霉菌生防机制的研究

摘要

辣椒是我国重要的蔬菜之一，具有重要的经济价值。辣椒疫病是一种毁灭性病害，由辣椒疫霉菌（Phytophthora capsici）侵染引起的。辣椒疫霉菌产生卵孢子，其卵孢子具有抗逆性、忍耐极端环境条件的能力，这也使该病害成为最难防治的土传病害之一。化学防治一直是该病害的主要防治手段，由于杀菌剂的广泛使用，不仅使病原菌产生抗药性，同时也污染了环境。最近研究表明，木霉菌可防治辣椒疫病，但其对卵孢子作用机制还没有被说明。因此在这个研究中，用筛选获得的两个木霉菌株进行了重寄生作用和拮抗化合物筛选研究，为生物防治辣椒疫病提供了理论依据和奠基了应用基础。
　　 1.木霉菌对辣椒疫霉菌的重寄生作用
　　 通过木霉菌对辣椒疫霉菌菌丝的拮抗作用研究，获得了拮抗作用最好的棘孢木霉（T.asperellum）菌株Thz01，其能在7d左右完全降解辣椒疫霉菌菌丝体。在此基础上，用光学显微镜和透射电镜进一步研究和观察了该菌株对辣椒疫霉菌卵孢子的拮抗作用机制。在光学显微镜下，木霉菌丝接触卵孢子5天后，20％卵孢子被木霉菌侵入;10天后，为54.6％，15天后70％，20天后，为80％。透射电子显微镜观察结果显示，木霉菌丝穿透藏卵器，在藏卵器内壁和卵孢子间产生大量菌丝，引起未成熟的卵孢子凹陷，最后导致卵孢子解体，并在其内产生大量的分生孢子。我们第一次提供了木霉菌能重寄生辣椒疫霉菌卵孢子的证据。
　　 2.活性代谢物的分离、纯化和鉴定
　　 用本实验室获得的产生拮抗化合物的渐绿木霉菌株TS0404，研究其代谢物对辣椒疫霉菌的拮抗活性。通过大量的液体和固体发酵培养，用乙酸乙酯萃取，得到木霉代谢物的粗提物5g。然后将粗提物进行柱层析、薄层层析分离，得到具有活性的代谢物组分约0.5g。经液相色谱与质谱连用检测，发现该组分中有两个化合物。质谱初步分析显示，这两个化合物具有部分相同结构的基团。

目录

论文说明

声明

致谢

摘要

第一章 文献综述

第一节 辣椒疫病

1．1 辣椒疫霉菌分类地位及其特征

1．2 寄主范围

1．3 危害症状

1．4 侵染循环及侵染机制

1．5 卵孢子的形成

1．6 卵孢子的萌发

1．7 辣椒疫霉的防治

第二节 木霉生防机制

2．1 重寄生作用

2．2 产生抗菌类物质

2．3 协同作用

第三节 次生代谢物的分离和纯化

3．1 木霉次生代谢物质的主要分离方法

第四节 本研究的目的和意义

第二章 木霉菌对辣椒疫霉菌的重寄生作用

1 材料与方法

1．1 供试菌株

1．2 实验方法

2 结果

2．1 对峙培养法筛选的菌株

2．2 形态学鉴定结果

2．3 分子鉴定结果

2．4 光学显微镜下观察结果

2．5 扫描电镜观察结果

2．6 透射电镜实验结果

3 讨论

第三章 木霉次生代谢物的分离鉴定

1 材料和方法

1．1 实验材料

1．2 实验方法

2 结果与分析

2．1 木霉菌株筛选结果

2．2 代谢物粗提样品的柱层析分离结果

2．3 代谢物粗提样品对辣椒疫霉菌的活性测试结果

2．4 代谢物粗提样品对于炭疽菌的活性测试结果

2．5 代谢物薄层层析和活性测试结果

2．6 液质联用检测结果

2．7 检测性液相色谱分析及半制备液相色谱试验结果

2．8 红外吸收色谱结果

3 讨论

参考文献

附录1：试验主要仪器和设备

附录2：主要化学试剂和分子生物学试剂

附录3：常用培养基和试剂的配方

附录4 ITS和Tef1-α测序拼接得到的序列