Delta阿片受体激动剂对脓毒症大鼠肝线粒体呼吸功能的保护作用

摘要

目的:
　　探讨Delta阿片受体激动剂DADLE(D-Ala2-D-Leu5-enkephalin)对脓毒症大鼠肝线粒体呼吸功能的保护作用。
　　方法:
　　60只清洁级健康雄性SD大鼠，体重260～300g，随机分为3组:假手术组(SO组)、脓毒症组（SEP组）和DADLE(5mg/Kg)组，每组20只。经腹腔内注射4％戊巴比妥(1ml/kg)麻醉后制模。采用改良盲肠结扎穿孔方法(CLP)建立大鼠脓毒症模型，假手术组除不结扎刺穿盲肠外，其余操作同SEP组，DADLE组模型建立后立即按5ml/kg剂量腹腔注射浓度为0.5mg/ml的DALDE。制模8小时后再次经腹腔内注射4％戊巴比妥(1ml/kg)麻醉。经腹主动脉抽血3ml，抗凝制备血清检测ALT、AST、TBIL水平。迅速冰面取肝，4℃分离液中制备线肝粒体悬液。考马斯亮兰测定肝细胞线粒体蛋白浓度，采用Clark氧电极技术测定反映肝细胞线粒体呼吸耗氧功能的呼吸控制率(RCR)与磷/氧(P/O)比值。采用高效液相色谱法测定反映肝脏细胞完整性及能量代谢功能的肝组织ATP、ADP、AMP含量。以及10％甲醛固定肝组织，HE染色观察肝组织细胞学病理改变。
　　结果:
　　1.CLP后大鼠血清中肝功能指标ALT、AST、TBIL的浓度显著升高，肝脏病理损害明显，出现脓毒症症状，说明脓毒症大鼠模型的制备是成功的。
　　2.与SO组比较，其余两组ATP、ADP、AMP含量均明显降低(P＜0.05)，ALT和AST明显升高(P＜0.05)，呼吸控制率(RCR)、磷/氧化(ADP/O)均明显降低;而态3呼吸速率和态4呼吸速率明显升高(P＜0.05)，提示脓毒症早期肝功能受损，肝线粒体呼吸功能明显受抑。
　　3.DADLE干预后，与SEP组比较，血清ALT、AST、TBIL水平明显降低(P＜0.05)，ATP含量明显升高(P＜0.05)， RCR和ADP/O明显提高(P＜0.05)，态3呼吸速率和态4呼吸速率明显降低(P＜0.05)，肝脏病理损害减轻。表明DADLE对肝细胞及线粒体呼吸功能具有保护作用，提示早期肝脏功能及其线粒体损伤多处于可逆阶段，为功能性而非结构性损伤。
　　结论:
　　1.脓毒症时肝细胞及线粒体可见明显损伤性改变，表现为呼吸耗氧功能及细胞完整性及能量代谢功能的变化，但早期肝脏功能及其线粒体损伤为可逆性损伤。
　　2.DADLE阿片受体激动剂对脓毒症早期肝脏线粒体呼吸功能具有保护作用，能改善在脓毒症缺氧状态下的肝细胞能量代谢。